公开(公告)号：CN101333532A

公开(公告)日：2008-12-31

申请号：CN200810041461.8

申请日：2008-08-07

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 殷明 ,  沈颖华 ,  石莎 ,  聂惠贞

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/68 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及的是一种生物技术领域的建立神经元烟碱型乙酰胆碱亚型受体细胞模型的方法，包括如下步骤：第一步，通过双酶切后产物定向连接将APP695基因克隆进pcDNA3.1(－)质粒；第二步，将pcDNA3.1(－)－APP695用脂质体方法转染进SH－EP1－α7细胞并用筛选抗生素进行加压筛选；第三步，用逆转录－聚合酶链反应方法检测APP695 mRNA表达；第四步，用Western－blotting检测细胞克隆APP695蛋白表达；用ELISA检测细胞外液中Aβ的表达。本发明建立神经元烟碱型乙酰胆碱α7亚型受体和Aβ共表达的细胞模型，可用于研究α7烟碱受体亚型的激动对于Aβ水平及APP加工修饰的影响，为对烟碱受体亚型在AD发病作用的研究提供了有力工具。

公开(公告)号：CN101157918A

公开(公告)日：2008-04-09

申请号：CN200710046149.3

申请日：2007-09-20

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 殷明 ,  聂惠贞 ,  沈颖华 ,  王泽剑 ,  李佐青

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及的是一种生物技术领域的建立神经元烟碱型乙酰胆碱亚型受体细胞模型的方法。包括如下步骤：①将APP695基因克隆进pcDNA3.1(－)质粒；②将pcDNA3.1(－)－APP695用脂质体方法稳定转染进SH－EP1－α4β2细胞并用筛选抗生素进行加压筛选；③稳定转染细胞克隆APP695 mRNA表达的鉴定；④稳定转染细胞克隆APP695和Aβ蛋白表达的鉴定；⑤稳定转染细胞克隆上烟碱α4β2受体功能鉴定，用膜片钳鉴定稳定转染细胞克隆上烟碱α4β2受体的功能。本发明获得稳定表达烟碱α4β2受体和Aβ的细胞株，建立神经元烟碱型乙酰胆碱α4β2亚型受体和Aβ共表达的细胞模型，是解决对于AD发病及治疗聚焦在烟碱受体亚型的疑难问题，它为此提供了有力工具。为预防和治疗AD的药物提供了有效的途径。