公开(公告)号：CN117487830A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311202918.X

申请日：2023-09-18

Applicant: 三峡大学

Inventor： 杨潇 ,  崇金阳 ,  贺诚 ,  饶欣悦 ,  涂璇 ,  龚大春 ,  徐晨阳 ,  刘克宁

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C12N15/53

Abstract: 本发明公开了一种用于多片段快速高效组装构建质粒的方法，首先通过引物设计在待组装片段中引入TypeIIS限制性内切酶的酶切位点，并利用设计的引物进行扩增和纯化，然后将得到的待组装片段任意比混合后再TypeIIS限制性内切酶和T4 DNA连接酶的作用下进行自组装，得到目的片段；然后通过PCR技术扩增目的片段，最后将目的片段连接至线性化载体上，获得重组质粒，并利用菌落PCR技术和测序进行验证，从而获得正确组装的重组质粒。本发明在组装过程中不依赖于片段摩尔比，同时也不需要将目的片段转入专用载体后再与目标载体进行连接，显著简化了实验方法，提高了重组效率。