公开(公告)号：CN111349649B

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN202010181807.5

申请日：2020-03-16

Applicant: 三峡大学

Inventor： 沈祥陵 ,  吕阳 ,  王佩 ,  韩少鹏 ,  曾弓剑 ,  周超 ,  刘文

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/10 ,  C12N15/53

Abstract: 本发明公开了一种用于双孢蘑菇的基因编辑的方法及应用。本发明对双孢蘑菇序列进行分析，得到了人类同源U6启动子序列，并构建了能高效表达Cas9蛋白和gRNA的CRISPR/Cas9载体，建立了一套对双孢蘑菇基因进行精确编辑的基因编辑体系。本发明的试验结果表明，本发明所建立的双孢蘑菇基因编辑体系能够成功高效的对双孢蘑菇基因AbPPO4进行基因编辑。本发明所发明的基因编辑技术可以对双孢蘑菇的基因进行精确定向编辑，能够在双孢蘑菇的育种，改良和研究中得以运用。

公开(公告)号：CN111349649A

公开(公告)日：2020-06-30

申请号：CN202010181807.5

申请日：2020-03-16

Applicant: 三峡大学

Inventor： 沈祥陵 ,  吕阳 ,  王佩 ,  韩少鹏 ,  曾弓剑 ,  周超 ,  刘文

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/10 ,  C12N15/53

Abstract: 本发明公开了一种用于双孢蘑菇的基因编辑的方法及应用。本发明对双孢蘑菇序列进行分析，得到了人类同源U6启动子序列，并构建了能高效表达Cas9蛋白和gRNA的CRISPR/Cas9载体，建立了一套对双孢蘑菇基因进行精确编辑的基因编辑体系。本发明的试验结果表明，本发明所建立的双孢蘑菇基因编辑体系能够成功高效的对双孢蘑菇基因AbPPO4进行基因编辑。本发明所发明的基因编辑技术可以对双孢蘑菇的基因进行精确定向编辑，能够在双孢蘑菇的育种，改良和研究中得以运用。

公开(公告)号：CN118421661A

公开(公告)日：2024-08-02

申请号：CN202410577636.6

申请日：2024-05-10

Applicant: 三峡大学

Inventor： 沈祥陵 ,  李贵轩 ,  韩少鹏 ,  曾弓剑 ,  胡永峰 ,  秦心儿 ,  邓竹英 ,  吕阳 ,  王佩

IPC: C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种双孢蘑菇甲基化转移酶AbRad8基因、重组载体和表达方法，分析鉴定双孢蘑菇中的甲基化转移酶AbRad8基因；通过同源重组法将AbRad8基因插入至pGEX‑4t‑1载体中，构建了重组原核表达载体pGEX‑4t‑AbRad8，然后将重组载体转入大肠杆菌中获得了两种重组菌，然后利用IPTG进行原核表达重组菌的诱导表达从而获得了AbRad8重组蛋白，体外实验证明该重组蛋白具有甲基化活性。本发明通过系统发育分析和结构域分析解释了食用菌的进化保守性，且得到的AbRad8基因对揭示双孢蘑菇生长发育过程和抗褐化机制提供了理论参考，为阐明食用菌DNA甲基化转移酶基因的功能奠定了基础。