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公开(公告)号：CN105950597A
公开(公告)日：2016-09-21
申请号：CN201610512679.1
申请日：2016-07-01
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高酸性脲酶热稳定性的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过融合酸性脲酶结构基因，获得了最适温度降低,由70℃降解到60℃,而热稳定性提高的脲酶突变体。在70℃加热30min,脲酶残留活力由80％提高到96％。本发明首次提出，通过融合酸性脲酶结构基因UreA、UreB、UreC的方法来提高酸性脲酶热稳定性的策略，并且获得了热稳定性提高的酸性脲酶，更有利于酸性脲酶的工业化应用。
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公开(公告)号：CN104805508A
公开(公告)日：2015-07-29
申请号：CN201510213073.3
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C40B50/06
Abstract: 本发明一种基于合成单链DNA文库进化代谢途径的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用合成的DNA单链文库，以PCR技术介导重组突变文库的构建。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104789556A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510212925.7
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1058 , C12N15/1031 , C12Q2521/101 , C12Q2521/501 , C12Q2531/113 , C12Q2533/101 , C12Q2563/179
Abstract: 本发明公开了一种基于合成单链DNA文库快速高效组合进化DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明先后或同时构建DNA单链突变体文库和双链突变体文库，将突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对启动子、酶和代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，可用于调控序列如启动子、核糖体结合位点等基因的快速定向进化，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104789555A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510212921.9
申请日：2015-04-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种基于合成单链DNA文库进化基因表达调控元件的方法，属于基因工程技术领域。本发明基于PCR技术，先得到单链突变体，再以此为模板获得多样性丰富的双链突变体文库。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对启动子进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN103614352B
公开(公告)日：2015-07-08
申请号：CN201310597818.1
申请日：2013-11-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效重组表达透明质酸酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过在重组透明质酸酶基因N端添加一段编码组氨酸的核苷酸序列，不仅简化了透明质酸酶的纯化步骤，同时实现了重组透明质酸酶的高活性分泌表达，活性达到了21333.33U/mL。本发明所构建的重组毕赤酵母工程菌株，具有非常大的应用前景。本发明所提出的提高透明质酸酶高效表达制备的方法，进一步降低了透明质酸酶的生产成本，为工业化生产奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104293726A
公开(公告)日：2015-01-21
申请号：CN201410555019.2
申请日：2014-10-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2474 , C12N9/0006 , C12N9/1096 , C12N9/1294 , C12N15/75 , C12P19/26 , C12Y207/07009 , C12Y302/01035
Abstract: 本发明公开了一种产小分子透明质酸的重组枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA整合于枯草芽孢杆菌实现了透明质酸的生产；同时，对HA的合成途径关键基因进行过表达实现HA在枯草芽孢杆菌的高产。在此基础上，引入水蛭来源的透明质酸酶整合至枯草芽孢杆菌基因组上，置于受IPTG诱导控制的启动子Pgrac下分泌表达，通过控制透明质酸酶的分泌表达量和诱导启动时间来制备不同分子量的小分子透明质酸产物，制备的产物分子量范围有差异，对于微生物直接生产特定范围的小分子透明质酸具有重要的指导借鉴意义。本发明为高效制备小分子透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN104263707A
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201410526361.X
申请日：2014-10-08
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2474 , C12Y302/01035
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母重组表达透明质酸酶的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过在重组透明质酸酶基因前段融合一段信号肽序列，解决了原重组菌株产量较低的问题，实现了重组透明质酸酶在毕赤酵母中产量的显著提高。本发明中工程菌的成功构建，为进一步降低水蛭透明质酸酶的生产成本和扩大应用范围奠定了一定的基础，适合于工业化生产。
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公开(公告)号：CN104232804A
公开(公告)日：2014-12-24
申请号：CN201410523240.X
申请日：2014-10-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种梯度变温诱导提高透明质酸酶表达量的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过降低重组毕赤酵母菌株在诱导阶段的诱导温度，解决了原重组菌株产量较低的问题，实现了重组透明质酸酶在毕赤酵母中产量的显著提高，为进一步降低水蛭透明质酸酶的生产成本和扩大应用范围奠定了一定的基础，适合于工业化生产。
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公开(公告)号：CN104004701A
公开(公告)日：2014-08-27
申请号：CN201410274445.9
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高产5-氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pACYCDuet-1过量表达5-氨基乙酰丙酸C5合成途径关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基础上，将来源于大肠杆菌血红素生物合成途径中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD编码)及粪卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF编码)，使用pCDFDuet-1单独表达或共表达两个酶基因，构建重组菌株。通过发酵验证，单独表达hemD或hemF以及共表达hemD和hemF，ALA产量均明显提高。
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