空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素表达载体的构建、表达及单克隆抗体的制备

    公开(公告)号:CN103276009A

    公开(公告)日:2013-09-04

    申请号:CN201310198573.5

    申请日:2013-05-24

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素表达载体的构建、表达及单克隆抗体的制备。所说的空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素表达载体,是pET-cdtC和pGEX-6p-1-cdtC。抗CdtC单克隆抗体的制备方法是:(1)His-CdtC、GST-CdtC蛋白的原核表达并纯化;(2)以GST-CdtC免疫BABL/c小鼠,取效价比较高的小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,培养并筛选出分泌特异性抗体的细胞株;(3)将筛选的细胞株注入BABL/c小鼠腹腔,获得高浓度的单克隆抗体,即完成单克隆抗体的制备;(4)对单克隆抗体的上清,腹水效价测定。

    一种食品中弯曲菌的定量检测方法

    公开(公告)号:CN101824462B

    公开(公告)日:2012-02-08

    申请号:CN201010180516.0

    申请日:2010-05-21

    Applicant: 扬州大学

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明涉及细菌分离技术,具体涉及一种特别是对食品中的弯曲菌(Campylobacter)的直接定量计数方法。该方法是将样品在含多粘菌素B、甲氧苄氨嘧啶、利福平、放线菌酮、头孢哌酮和两性霉素B6种抗生素和生长促进剂的固体CCDA培养基培养后直接进行弯曲菌的计数与分离。本发明较经典方法的细菌培养、分离和鉴定方法简便、特异、准确。

    一种产单核细胞李斯特菌灭活疫苗及其制备方法

    公开(公告)号:CN101264322A

    公开(公告)日:2008-09-17

    申请号:CN200810025335.3

    申请日:2008-04-25

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,具体是一种产单核细胞李斯特菌灭活疫苗及其制备方法。所说的产单核细胞李斯特菌灭活疫苗制备方法,是将产单核细胞李斯特菌经60Co辐照灭活制备灭活疫苗。通过辐照灭活的方法,保留了病原体表面的保护性抗原成分,能够激发保护性T细胞免疫应答和体液免疫应答。这些优点在研制针对胞内病原体的灭活疫苗时显得尤为重要。

    H9亚型禽流感病毒的快速检测方法

    公开(公告)号:CN101196476A

    公开(公告)日:2008-06-11

    申请号:CN200710302589.0

    申请日:2007-12-27

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: H9亚型禽流感病毒的快速检测方法,公开了一种鉴定病毒,特别是鉴定禽流感H9亚型病毒的检测方法。采用Trizol kit提取样本基因RNA,然后进行RT-LAMP扩增病毒基质蛋白基因的特定区域,最后加入显色液鉴定,如果颜色变为绿色,则待检样品为H9N2亚型禽流感病毒,如果颜色为黄色,则待检样品不是H9N2亚型禽流感病毒。本发明较经典方法的病毒分离、鉴定和血清学分型试验方法以及目前普遍采用的PCR方法快速、准确。

    快速鉴定新城疫病毒并能鉴别其强、弱毒株的PCR方法

    公开(公告)号:CN101182588A

    公开(公告)日:2008-05-21

    申请号:CN200710191217.5

    申请日:2007-12-05

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 快速鉴定新城疫病毒并能鉴别其强、弱毒株的PCR方法,涉及一种鉴定病毒,特别是鉴别新城疫病毒强、弱毒株的检测方法。先用Trizol kit提取样本基因RNA,再进行反转录合成cDNA,同时,采用热裂解法提取大肠杆菌DNA模板,然后对样本基因的cDNA和大肠杆菌DNA模板进行一次性PCR扩增特定的多个基因,最后经电泳鉴定。本发明形成大量的基因复制片段,比较方便,一次就能鉴定是否为新城疫病毒,以及属于强、弱毒株作出判断。本发明较经典的病毒分离、鉴定和毒力鉴别试验方法快速、准确。

    一种鸡特异性的CpG ODN及其应用

    公开(公告)号:CN1810823A

    公开(公告)日:2006-08-02

    申请号:CN200610038448.8

    申请日:2006-02-23

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种CpG DNA,特别是涉及用作鸡特异性的CpG ODN,以及这种CpG ODN作为H5亚型禽流感DNA疫苗佐剂的用途。该CpG ODN序列具体为5’-TTGGAA CGTTCCTTTCCAACGTTGGTTTGGAACGTTCCTT-3’,嵌合了本发明CpG ODN为佐剂的H5亚型禽流感DNA疫苗,通过口服、滴鼻途径对鸡直接进行免疫,可显著增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫后的攻毒保护率,提高免疫家禽的肠粘膜IgA抗体水平;且本发明中构建的DNA疫苗具有安全、免疫后不干扰禽流感疫情的监测、可克服母源抗体的干扰及使用方便等优点。

    沙门氏菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR快速检测方法

    公开(公告)号:CN1266284C

    公开(公告)日:2006-07-26

    申请号:CN200410041611.7

    申请日:2004-08-02

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种鉴定细菌,特别是鉴定沙门氏菌、产单核细胞李斯特菌的检测方法。先将沙门氏菌和大肠杆菌YZU_DSL1分别采用热裂解法提取各自DNA模板、产单核细胞李斯特菌采用酶解法提取DNA模板,然后进行一次性PCR扩增特定的多个基因,最后以大肠杆菌为指示菌电泳鉴定。本发明通过将样本的DNA,一次性同时对可能存在的沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因、产单核细胞溶血素基因扩增和一定存在的大肠杆菌YZU_DSL1质粒进行扩增,形成大量的基因复制片段,比较方便,一次就能鉴定是否为沙门氏菌、产单核细胞李斯特菌,并对阴性结果的反应体系的正确性作出判断。本发明较经典方法的细菌分离、鉴定和血清学分型试验方法快速、准确。

    禽流感病毒多重PCR快速检测方法

    公开(公告)号:CN1560597A

    公开(公告)日:2005-01-05

    申请号:CN200410014289.9

    申请日:2004-03-09

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种鉴定病毒,特别是鉴定禽流感H5、H9亚型病毒的检测方法。用Trizol kit提取样本基因RNA,再进行反转录合成cDNA,然后进行一次性PCR扩增特定的多个基因,最后电泳鉴定。由于单个疑似病例样本中的特征基因数量极少,本发明通过将样本的RNA反转录合成cDNA,再一次性同时对可能存在的NP、H5A、H9A基因扩增,形成大量的基因复制片段,比较方便,一次就能鉴定是否为禽流感,以及属于H5或H9亚型作出判断。本发明较经典方法的病毒分离、鉴定和血清学分型试验方法快速、准确。

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