公开(公告)号：CN114703188A

公开(公告)日：2022-07-05

申请号：CN202210336613.7

申请日：2022-03-31

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 曾凡锁 ,  高尚珠 ,  齐凤慧 ,  詹亚光 ,  辛颖 ,  关欣 ,  张桂芹 ,  卢晗

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00 ,  C12Q1/6897

Abstract: 本发明涉及一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.6及其克隆与应用。本发明首次成功克隆了水曲柳RNA聚合酶Ⅲ型启动子——水曲柳内源U6基因启动子proFmU6.6，并成功构建了水曲柳U6基因启动子活性检测载体，通过瞬时转化水曲柳幼苗、GUS染色及gus基因转录表达验证，证明该启动子具有高效转录活性。实验证明四种水曲柳U6基因截短启动子proFmU6.6.1、proFmU6.6.2、proFmU6.6.3、proFmU6.6.4均有启动活性，并成功在CRISPR/Cas9系统中应用。水曲柳U6基因启动子proFmU6.6克隆及启动子活性的表达分析，为研究水曲柳及近缘植物的转化研究提供了高效的启动子序列，也可以实现对水曲柳高效精准的种质创新与品种遗传改良。

公开(公告)号：CN114591882A

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN202210201087.3

申请日：2022-03-03

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 范桂枝 ,  高兴蕾 ,  王滋涵 ,  由香玲 ,  詹亚光

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明是一种利用酶解法获得刺五加愈伤组织单细胞，并对其进行农杆菌转化获得转GFP基因的方法，它属于生物技术领域。采用1.5％纤维素酶R‑10和0.2％离析酶R‑10酶解刺五加愈伤组织6h后400×g离心5min时，单细胞产量最大、活力最强，分别为1.88×106个·g‑1和90％。40％PEG浓度下农杆菌转化单细胞40min时，单细胞瞬时转化效率达30.34％。本发明提供了一种高产刺五加单细胞的酶解体系，同时获得了一致的转GFP基因的单细胞，该发明将为从单细胞水平研究基因的功能，为基因在不同种类细胞中的功能分析提供技术支撑。

公开(公告)号：CN111758565B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN201910725115.X

申请日：2019-08-07

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 詹亚光 ,  于磊 ,  丁一巍

IPC: A01H4/00 ,  A01G17/00 ,  A01G24/15 ,  A01G24/28

Abstract: 本发明提供了一种水曲柳组培苗生根与移栽一体化的技术，先将组培获得的半木质化不定枝单株在壮苗培养基(WPM+2.0mg/L 6‑BA+20g/L蔗糖+7g/L琼脂)中培养30d后，直接栽植到含有生根培养基(WPM+1.4mg/L IBA+0.7mg/L NAA，不含蔗糖和琼脂)基质(草炭土：蛭石＝3：1)的育苗袋中，再用塑料拉口袋封闭，在特定光照、温湿度条件下培养，7d后打开袋口，14d后撤袋，恒温恒湿培养30d后不定枝生根并长出新叶，成活率为63.33％；本发明将生根与移栽简化为一步，是水曲柳组培苗快速繁殖的关键技术之一，节省了时间和成本，为水曲柳快速繁殖的规模化生产奠定了坚实的基础。

公开(公告)号：CN112538107A

公开(公告)日：2021-03-23

申请号：CN201910890620.X

申请日：2019-09-20

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 尹静 ,  詹亚光 ,  杨杰 ,  肖佳雷 ,  李影 ,  张玉琦 ,  常存

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了三萜相关蛋白质与其编码基因以及在提高植物三萜化合物含量中的应用。本发明公开的三萜相关蛋白质为TRP1、TRP2或TRP3，TRP1为氨基酸序列是序列1的蛋白质；TRP2为氨基酸序列是序列3的蛋白质；TRP3为氨基酸序列是序列5的蛋白质。本发明的三萜相关蛋白及其编码基因以及TRP2和TRP3的组合、BpW和TRP1的组合均可以用来培育三萜化合物合成提高的植物，并进一步为植物中三萜化合物的高效合成调控和生物技术的利用提供了有效的基因资源，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN112075340A

公开(公告)日：2020-12-15

申请号：CN201910504136.9

申请日：2019-06-12

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 齐凤慧 ,  刘林 ,  刘华领 ,  詹亚光 ,  曾凡锁

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明是一种快速打破水曲柳组培苗休眠芽并成功离体繁殖的方法，以水曲柳带休眠芽点的组培苗或者带休眠芽茎段为材料，以WPM为基础培养基，添加不同浓度的TDZ，两种光照条件(光，暗)，两种培养方式(固体、液体)，温度为25℃，培养7d内，水曲柳休眠芽解除休眠状态，开始萌发，培养24d，固体培养的萌发率最高达57.14％，液体培养的萌发率最高达100％，在壮苗和增殖培养中，培养30d，A6培养基成活率100％，平均苗长为1.68cm，Z1培养基成活率75％，平均苗高2.65cm。该方法不仅可以快速打破水曲柳休眠芽进行离体繁殖，而且该方法可以进行循环使用，是一项可持续的循环培养生产方法，并且，该方法激素单一，浓度低，过程简单，具有可控性和低成本特征，适用于不同的生产条件，为规模化繁殖水曲柳苗木提供技术支持。

公开(公告)号：CN111758467A

公开(公告)日：2020-10-13

申请号：CN201910725126.8

申请日：2019-08-07

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 于磊 ,  詹亚光 ,  曾凡锁

IPC: A01G17/00 ,  A01G7/06 ,  A01G24/15 ,  A01G24/28 ,  A01G24/12

Abstract: 本发明提供了一种解除水曲柳组培苗移栽过程中非生理性休眠的方法，所述内容包括两部分：一、水曲柳组培苗高效移栽技术：通过对移栽过程中的栽培基质、光照强度、组培苗类型等关键因素对水曲柳组培苗移栽影响的研究，确定水曲柳组培苗高效移栽技术，移栽30d后成活率可以达到93.33％；二、水曲柳组培苗移栽过程中出现的非生理性休眠的解除方案：针对移栽苗过早形成顶芽停止生长和休眠现象，本发明通过向植株喷施100mg/L GA3可重新诱导新芽萌发，萌发率达到90％。本发明可以有效解决水曲柳组培苗移栽后发生休眠导致的幼苗枯死、烂根等移栽障碍，提高了水曲柳的生长量，为水曲柳组培微繁工厂化育苗技术提供了坚实的保障。

公开(公告)号：CN105255924A

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201510582797.5

申请日：2015-09-14

Applicant: 东北林业大学 ,  尹静 ,  詹亚光

Inventor： 尹静 ,  马泓思 ,  詹亚光 ,  王艳 ,  张梦岩 ,  李欣 ,  张秀峰

IPC: C12N15/61 ,  C12N9/90 ,  C12N15/11 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明属于白桦转基因技术领域，具体涉及白桦环阿齐醇合酶基因BPX3及调控白桦三萜含量的应用。其特征在于，利用设计的引物BPX3R和BPX3F(图2)，从白桦植株中克隆得到环阿齐醇合酶基因的cDNA全长序列，其序列如图1所示，暂命名为BPX3。将构建的BPX3基因p121-N4的RNAi载体，通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法遗传转化白桦无性系，筛选获得转基因株系。转基因白桦苗Y-12和B-6中，BPX3被抑制，且BPY和BPW的基因相对表达量显著被提高；转基因白桦植株愈伤组织中白桦酯酸和齐墩果酸含量显著高于野生型，表明BPX3基因RNA抑制促进了目标三萜产物白桦酯酸和齐墩果酸的合成和积累。本研究的开展将为白桦三萜类物质代谢途径的遗传修饰及生物技术的利用奠定了基础。可用于利用转基因技术提高白桦三萜有效成分含量的研究和产业化中，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN104094840A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201310111904.7

申请日：2013-04-02

Applicant: 东北林业大学 ,  詹亚光 ,  刘孚婧

Inventor： 詹亚光 ,  刘孚婧 ,  齐凤慧 ,  尹静 ,  曾凡锁 ,  范桂枝

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属于细胞工程技术领域。具体涉及一种花曲柳(Fraxinus rhynchophylla Hance.)愈伤组织团块悬浮培养体系的建立方法。本发明以优良花曲柳茎段和叶片作为原始材料，在添加了激素NAA和TDZ的WPM固体培养基上诱导出愈伤组织，将愈伤组织接种到添加了激素NAA和TDZ的WPM液体培养基中，光照振荡培养。经过多代定向诱导驯化，建立了生长量稳定，增殖迅速，团块均匀的愈伤组织团块悬浮系。本发明具有方法简单易行，操作性强，增殖系数可观，能够促进花曲柳的快速繁殖的特点。

公开(公告)号：CN104087644A

公开(公告)日：2014-10-08

申请号：CN201410270442.8

申请日：2014-06-18

Applicant: 东北林业大学 ,  曾凡锁 ,  姜涛

Inventor： 曾凡锁 ,  姜涛 ,  詹亚光 ,  辛颖 ,  孙丰坤 ,  齐凤慧 ,  范桂枝 ,  由香玲 ,  尹静

IPC: C12P33/00

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种利用氢气提高白桦细胞中总三萜和白桦脂醇含量的方法。以白桦悬浮细胞为材料，按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中，附加0.1～0.3mg/L6-BA和0.5～4.0mg/L TDZ，蔗糖20g/L，酸水解酪蛋白1g/L，pH5.5～6.0。在细胞悬浮培养第8天通入氢气使其终浓度为0.5-1.5mmol/L，培养12h后收获，白桦脂醇含量最高为1.11mg/gDW，是对照组185.1％。培养24h后收获，细胞内总三萜含量达到24.37mg/gDW，为对照组的181.32％。氢气具有无毒无害的优势，方便代谢产物的分离和纯化。该发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和白桦脂醇药物提供了一种新途径。

公开(公告)号：CN103952459A

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201410211396.4

申请日：2014-05-20

Applicant: 东北林业大学 ,  曾凡锁 ,  詹亚光

Inventor： 曾凡锁 ,  詹亚光 ,  李蕾蕾 ,  辛颖 ,  何之龙 ,  周珊 ,  徐速

IPC: C12P33/00 ,  C12P1/00

Abstract: 本发明提供了一种促进次生代谢产物积累的新方法和5-氮杂胞苷的新用途，涉及生物工程技术领域。其特点在于利用添加一定浓度5-氮杂胞苷诱导子，提高白桦次生代谢产物总三萜和齐墩果酸的积累。本方法的发明，为利用植物细胞离体培养技术进行工业化大规模生产三萜及齐墩果酸类药物提供了一种新方法。