公开(公告)号：CN115786150A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202210966122.0

申请日：2022-08-12

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈勇 ,  王斯楠 ,  应汉杰 ,  余斌 ,  王诗萌 ,  陈天鹏 ,  孙文俊 ,  朱家庆

IPC: C12N1/19 ,  C12N9/38 ,  C12N15/31 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12P19/14 ,  C12P19/00 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种表面展示β‑半乳糖苷酶的重组毕赤酵母菌的构建方法与应用，所述重组毕赤酵母菌是在原始毕赤酵母Pichia pastoris GS115中异源表达来源于米曲霉BK03的β‑半乳糖苷酶基因lacA与来源于酿酒酵母的细胞壁蛋白Flo1p。本发明通过将β‑半乳糖苷酶通过表面展示技术展示在细胞表面，酶的稳定性更好；同时，β‑半乳糖苷酶能够更多次地被重复利用，产低聚半乳糖的量较高。

公开(公告)号：CN114292761A

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN202111457265.0

申请日：2021-12-02

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  张涛 ,  陈勇 ,  孙文俊 ,  朱家庆 ,  刘丽 ,  蒋颖 ,  赵伟 ,  余斌

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/31 ,  C12N15/80 ,  C12P7/48 ,  C12N11/093 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一株黑曲霉基因工程菌及构建方法与应用，所述重组黑曲霉基因工程菌为在出发菌中过表达铁获取调控基因AcuK，得到重组黑曲霉基因工程菌。本发明通过基因敲除手段构建了一株铁获取调控基因AcuK过表达的重组黑曲霉基因工程菌。该重组基因工程菌使黑曲霉在固定化发酵产柠檬酸过程中生物膜量增加的同时减轻载体抱团现象，发挥出固定化发酵的优势，提高了柠檬酸的产量，缩短了发酵周期。

公开(公告)号：CN112779170A

公开(公告)日：2021-05-11

申请号：CN202110095568.6

申请日：2021-01-25

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  张涛 ,  陈勇 ,  孙文俊 ,  刘丽 ,  蒋颖 ,  赵伟 ,  朱家庆 ,  柳东 ,  余斌

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/87 ,  C12N15/31 ,  C12P7/48 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一株重组黑曲霉基因工程菌及构建方法和应用，所述重组黑曲霉基因工程菌中铁获取调控基因失活。该基因工程菌使黑曲霉在固定化发酵产柠檬酸过程中生物膜量减少，使载体孔径被堵死的现象得到有效缓解，增加了载体与外界的传氧传质效果，从而发挥出固定化发酵的优势，提高了柠檬酸的产量和糖酸转化率，缩短了发酵周期，有效解决了现有工业上黑曲霉发酵生产柠檬酸时产量低、发酵周期长的问题；且所得重组黑曲霉基因工程菌能够12批次连续发酵，发酵强度无明显下降。

公开(公告)号：CN110129245B

公开(公告)日：2020-12-04

申请号：CN201910309103.9

申请日：2019-07-08

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  俞莹 ,  陈勇 ,  任培芳 ,  刘娜 ,  陈天鹏 ,  孙文俊 ,  奚迅

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12N15/90 ,  C12N15/55 ,  C12P13/24 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一株敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌，该菌株中胞外核酸酶基因ExeP失活，所述的谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌ATCC13032，所述胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.1所示，失活后的胞外核酸酶ExeP的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过敲除敲除胞外核酸酶ExeP，减少胞外DNA的降解，加强了谷氨酸棒杆菌的成膜能力，利用本发明构建的敲除胞外核酸酶ExeP的谷氨酸棒杆菌发酵产脯氨酸，提高了脯氨酸连续化发酵的产量，缩短了发酵周期。

公开(公告)号：CN110106095A

公开(公告)日：2019-08-09

申请号：CN201910271574.5

申请日：2019-04-04

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 陈勇 ,  刘丽 ,  应汉杰 ,  余斌 ,  孙文俊 ,  杨乐云 ,  王芳娟 ,  欧阳平凯

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/90 ,  C12P7/48 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一株钙离子通道CchA基因失活的黑曲霉基因工程菌及其构建方法与应用，它是敲除钙离子通道CchA基因的黑曲霉菌。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法。进一步公开了基因工程菌在生产柠檬酸中的应用。本发明通过构建基因敲除钙离子通道CchA基因的黑曲霉基因工程菌，使黑曲霉在固定化发酵生产柠檬酸过程中生物膜产量降低并且疏水性降低，减轻了载体的抱团现象，提高了柠檬酸产量和糖转化效率，适宜于工业生产。

公开(公告)号：CN110004070A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910284360.1

申请日：2019-04-10

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  孙文俊 ,  陈勇 ,  余斌 ,  刘丽 ,  任培芳 ,  刘娜 ,  奚迅 ,  欧阳平凯

IPC: C12N1/15 ,  C12N9/24 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一株产木聚糖的黑曲霉基因工程菌，该菌株中Msb2基因失活；所述Msb2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Msb2基因失活后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法。本发明进一步地公开了基因工程菌在发酵生产木聚糖酶中的应用。本发明通过构建Msb2基因的黑曲霉基因工程菌，使黑曲霉在发酵产木聚糖酶过程中生物膜产量减少，并且黏附性变弱，提高了木聚糖酶的产量，缩短了发酵周期。

公开(公告)号：CN109402162A

公开(公告)日：2019-03-01

申请号：CN201811434012.X

申请日：2018-11-28

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 应汉杰 ,  奚迅 ,  陈勇 ,  杨乐云 ,  刘娜 ,  任培芳 ,  孙文俊

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/90 ,  C12N15/55 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种敲除酿酒酵母HO基因的方法，以酿酒酵母单倍体菌株为出发菌株，将基因敲除片段转化酿酒酵母单倍体菌株，G418抗性筛选获得阳性转化子，将含有Cre重组酶基因的质粒转化HO基因敲除的单倍体菌株，利用半乳糖诱导Cre重组酶表达，使kanMX抗性基因丢失，得到抗性基因丢失的重组菌，再通过连续培养丢失质粒，既得到敲除HO基因的酿酒酵母菌株。本发明可快速、高效地分离获得不含外来抗性基因的工业酿酒酵母单倍体，具有工艺简单、单倍体分离率高、敲除成功率高的优点。