公开(公告)号：CN101407823B

公开(公告)日：2010-08-11

申请号：CN200810209569.3

申请日：2008-11-28

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 刘关君 ,  刘桂丰 ,  杨传平 ,  刘明坤 ,  阎秀峰 ,  许志茹 ,  魏志刚 ,  王柏臣

IPC: C12N15/81

Abstract: 一种构建酵母双价通用表达载体的方法，它涉及一种构建双价表达载体的方法。本发明解决了现有构建载体的方法不能构建出可以表达任意目的基因的通用载体的问题。本发明构建酵母双价通用表达载体的方法按照以下步骤进行：一、根据酵母表达载体pYES2序列分别设计引物，进行PCR扩增获得目的片段PGAL1和目的片段CYC1；二、得到质粒pMD18-PGAL1；三、获得质粒pMD18-PC；四、双酶切后回收目的片段和质粒pYES2并连接；获得酵母双价通用表达载体pYES2-PC。用本发明的方法构建出的通用双价载体能够准确表达连接的基因，只需要将目的基因片段直接连接在本发明构建的通用双价表达载体上就可以准确表达。

公开(公告)号：CN101294165A

公开(公告)日：2008-10-29

申请号：CN200810064790.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 许志茹 ,  王柏臣 ,  刘关君 ,  刘昌财 ,  刘明坤 ,  魏志刚 ,  刘桂丰 ,  杨传平

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/11

Abstract: 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问题。方法：一、构建单价载体；二、制备两边带有EcoR I粘末端的35S－A－Tnos片段；三、制备两边带有EcoR I粘末端的开环B/pROK II；四、将步骤二和三得到的基因片段进行酶连接。通用引物为P35S－S1和Tnos－A1。本发明方法与目前构建pROKII双价载体的方法相比较，减少了连接和转化的次数具有步骤少、操作简单、构建周期短和不必更换酶切位点的优点，能够明显地提高工作效率。

公开(公告)号：CN101228848A

公开(公告)日：2008-07-30

申请号：CN200810064037.5

申请日：2008-02-27

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 李成浩 ,  刘宝光 ,  张含国 ,  刘桂丰

IPC: A01H4/00

Abstract: 一种红皮云杉体细胞胚诱导植株再生的方法，它涉及一种云杉体细胞胚诱导植株再生的方法。它解决了红皮云杉常规育种周期长、繁殖率低的问题。方法：一、合子胚培养愈伤组织；二、培养体细胞胚至成熟并进行干燥；三、培养成熟体细胞胚至体细胞胚萌发；四、继续培养至根和茎的形成，即得到红皮云杉再生植株。本发明一种红皮云杉体细胞胚诱导植株再生的方法，以红皮云杉未成熟种子为外植体诱导体细胞胚，获得再生植株，使红皮云杉的育种周期缩短了，比扦插进行无性繁殖的周期提高了3～6倍，繁殖率高。

公开(公告)号：CN101218895A

公开(公告)日：2008-07-16

申请号：CN200810063950.3

申请日：2008-01-30

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 李成浩 ,  王伟达 ,  张含国 ,  刘桂丰 ,  杨静莉

IPC: A01H4/00

Abstract: 一种长白落叶松离体培养不定芽诱导植株再生的方法，它涉及一种松树离体培养不定芽诱导植株再生的方法。它解决了长白落叶松组织培养器官发生困难、植株再生率低，及目前用长白落叶松的成熟胚、花芽和腋芽、幼嫩茎段作为外植体不定芽诱导率低的问题。方法：1.合子胚培养诱导愈伤组织；2.诱导生长不定芽；3.继续培养并诱导生根，即得到长白落叶松离体再生植株。本发明以长白落叶松成熟种子为外植体进行不定芽诱导，获得了高诱导率的不定芽，比目前已有不定芽诱导技术提高9倍以上，而且愈伤组织诱导率均高于90％，对于长白落叶松的大量扩繁和基因工程育种研究具有广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN1693462A

公开(公告)日：2005-11-09

申请号：CN200510009908.X

申请日：2005-04-19

Applicant: 东北林业大学

Inventor： 杨传平 ,  魏继承 ,  王超 ,  姜静 ,  刘桂丰 ,  刘关君

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82

Abstract: 东北白桦Myb转录因子基因，它属于基因工程技术领域。本发明采用抑制性消减cDNA文库构建，对文库克隆进行EST分析，从大量基因序列中筛选获得了该基因的部分序列，该序列5’端编码区完整，3’端不完整，应用3’RACE技术克隆出其全长cDNA序列，用Pfam程序中的蛋白质搜索对该蛋白进行家族预测，确定该基因为Myb蛋白家族，cDNA全长1298bp，编码区位置在44～1156碱基之间，长1113bp，包含370个氨基酸。Myb转录因子基因为花青素合成的关键调控基因，通过结合顺式元件MBS II调节下游基因的表达赋予花色，它具有很宽的市场前景，应用潜力在于未来通过基因工程手段塑造观赏植物，可用于花色调节和塑造彩叶植物。