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公开(公告)号：CN114395547B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202210151251.4
申请日：2022-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶的突变体及其在牛奶中的应用，属于基因工程技术领域以及酶工程技术领域。本发明通过将来源于Aspergillus oryzae的β‑半乳糖苷酶第132位氨基酸突变为苯丙氨酸构建得到Y132F突变株，使得最适pH提升至5.5、受到产物抑制的程度低于野生型，并具有更好的乳糖水解效果，适于在食品加工等领域的应用。
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公开(公告)号：CN114410496A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210140119.3
申请日：2022-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母外源蛋白产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过过量表达热胁迫应答相关基因HSP78和SSA3，促进热胁迫应答机制的激活帮助胞内蛋白正确折叠，进而提升了毕赤酵母外源蛋白的产量。过量表达HSP78和SSA3后菌株的绿色荧光蛋白、脂肪酶和磷脂酶的表达量都有不同程度的提升，其中绿色荧光蛋白表达量最高提升50％，脂肪酶表达量最高提升57％，磷脂酶表达量最高提升81％，表明热激蛋白HSP78和SSA3在毕赤酵母表达外源蛋白、并提升外源蛋白的产量中具有更好的应用价值。
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公开(公告)号：CN114395547A
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN202210151251.4
申请日：2022-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶的突变体及其在牛奶中的应用，属于基因工程技术领域以及酶工程技术领域。本发明通过将来源于Aspergillus oryzae的β‑半乳糖苷酶第132位氨基酸突变为苯丙氨酸构建得到Y132F突变株，使得最适pH提升至5.5、受到产物抑制的程度低于野生型，并具有更好的乳糖水解效果，适于在食品加工等领域的应用。
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公开(公告)号：CN111286497B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202010100869.9
申请日：2020-02-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化性能提高的脂肪酶及其应用，具体公开了一种最适反应温度、活性和热稳定性提高的脂肪酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供一种热稳定性提高的脂肪酶CALB突变体A146G‑L278M和A146G‑L278M‑A151P的基因及酯合成应用。本发明在野生型脂肪酶基因序列的基础上，进行理性设计选择合适的突变位点，最终获得了Tm值分别提高了3.3℃和4.2℃、最适反应温度提高5℃且催化效率提高了4.1倍的突变体。
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公开(公告)号：CN112961788A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110206889.9
申请日：2021-02-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种在里氏木霉中高产木聚糖酶的方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过表达转录激活因子XYR1增强木聚糖降解酶表达能力，并设计启动子Pcbh1上的转录因子结合位点，使得组成型表达XYR1能够对人工Pcbh1启动子形成进一步的激活作用，并用其表达同源木聚糖酶XYNII，获得重组里氏木霉。在纤维素诱导条件下，重组菌木聚糖酶的表达量达到6410U/mL，较亲本提高了9.28倍；同时木糖苷酶活力提高1.93倍，达到9.08U/mL；重组菌株可以解除碳代谢阻遏，以可溶性廉价碳源葡萄糖和乳糖为发酵碳源，同样可以获得2514U/mL和3446U/mL的胞外木聚糖酶活，同时木糖苷酶产量较亲本提高了9.3倍和2.3倍。同时，本发明生产的木聚糖酶协同商品纤维素进行秸秆糖化可以提高35％的糖化效率。
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公开(公告)号：CN106047732B
公开(公告)日：2019-09-03
申请号：CN201610356374.6
申请日：2016-05-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高分泌型耐热酵母基因工程菌及其应用，属于生物技术领域。本发明采用诱变和驯化，得到了一株能够在高温下高分泌量表达脂肪酶基因的酵母基因工程菌，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、保藏编号为CCTCC NO:M 2016278。经测序分析，脂肪酶基因及其启动子序列均未发生突变，说明诱变菌株高分泌量表达脂肪酶基因是由于基因组中其他基因序列发生了突变导致的。通过同源双交换的方式将脂肪酶基因敲除，构建的敲除菌株能够作为其他外源蛋白的表达宿主，可应用于提高其他外源基因的表达水平，并且可以在高温发酵条件进行发酵。
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公开(公告)号：CN108220270A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201810096248.0
申请日：2018-01-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的酸性脂肪酶突变体，属于基因工程技术领域。本发明的突变酶ATLLid与将218的Val替换成Trp的突变酶ATLV218W的水解活性显著提高。ATLLid和ATLV218W对对硝基苯酚月桂酸酯p‑nitrophenyl laurate(p‑NPL)的水解活性分别为2.26和3.86倍，对p‑NPL的催化效率kcat/Km值较ATL分别提高了3.85倍和9.46倍。与ATL相比，ATLLid和ATLV218W的最适pH也为5.0，并在pH 2.0‑10.0具有较好的稳定性。
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公开(公告)号：CN108018272A
公开(公告)日：2018-05-11
申请号：CN201810095370.6
申请日：2018-01-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的酸性脂肪酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明的突变酶ATLLid与将218的Val替换成Trp的突变酶ATLV218W的水解活性显著提高。ATLLid和ATLV218W对对硝基苯酚月桂酸酯p‑nitrophenyl laurate(p‑NPL)的水解活性分别为2.26和3.86倍，对p‑NPL的催化效率kcat/Km值较ATL分别提高了3.85倍和9.46倍。与ATL相比，ATLLid和ATLV218W的最适pH也为5.0，并在pH 2.0‑10.0具有较好的稳定性。
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