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公开(公告)号：CN110358754A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910023085.8
申请日：2019-01-10
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明涉及一种提高毕赤酵母表面展示β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法。该方法包括：(1)将来自于酿酒酵母基因组的Agα1蛋白的编码基因与来源于米曲霉β-葡萄糖醛酸酶(PGUS)的编码基因融合，导入到毕赤酵母细胞中，得到通过Agα1表面展示PGUS的重组酵母细胞；(2)将来自于酿酒酵母基因组的Pir1蛋白的编码基因与PGUS的编码基因融合，导入(1)获得的重组毕赤酵母细胞中，得到Agα1与Pir1两种锚定蛋白共同展示PGUS的重组酵母菌株。实验证明，这种方法能够显著增加毕赤酵母表面展示PGUS蛋白的量，且大幅提高了PGUS的稳定性。该方法解决了通过酶解法转化甘草酸为甘草次酸过程中存在的GUS不稳定与低效率的问题，同时对优化酵母表面展示效率的研究提供了方法指导。
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公开(公告)号：CN110055232A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201910022893.2
申请日：2019-01-10
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明涉及二个甘草蔗糖合酶及其在合成甘草次酸糖基化衍生物中的应用。本发明通过对乌拉尔甘草基因组数据库的系统分析，从乌拉尔甘草细胞中克隆得到二种来源于新型甘草蔗糖合酶基因GuSuS1和GuSuS2及其编码的蛋白，在大肠杆菌细胞中成功异源表达，并验证其催化功，同时偶联蔗糖合酶GuSuS1和糖基转移酶UGT73C11构建UDP循环再生系统，该系统可催化甘草次酸合成3-O-单葡萄糖基甘草次酸、30-O-单葡萄糖基甘草次酸、3-O-单葡萄糖基-30-O-单葡萄糖基甘草次酸三种甘草次酸糖基化衍生物。本发明填补了甘草蔗糖合酶研究方面的空白，为后续甘草细胞蔗糖及核苷糖代谢相关研究提供了一定的参考和依据，同时提供的UDP循环再生体系也大大简便了甘草次酸糖基化修饰过程。
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公开(公告)号：CN109628427A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201811564903.7
申请日：2018-12-20
Applicant: 北京理工大学
IPC: C12N9/24 , C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/81 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P33/00 , C12R1/19 , C12R1/84
CPC classification number: C12N9/2402 , C07K2319/30 , C12N15/70 , C12N15/815 , C12P33/00 , C12Y302/01031
Abstract: 本发明“一种高效制备甘草次酸的重组酶及方法”，属于酶工程领域。所述重组酶包括来源于土曲霉的β‑葡萄糖醛酸苷酶AtGUS的TIM桶结构域、及来源于米曲霉的β‑葡萄糖醛酸苷酶PGUS的糖基结构域SBD和免疫球蛋白状β‑三明治结构域IMD。该重组酶AtGUS‑mix性状优良，60℃下的热稳定性比野生酶AtGUS高550％，且比酶活比野生酶AtGUS和PGUS分别高2和6.9倍。重组酶AtGUS‑mix的底物转化率达到95.06％，GA的收率达到98.82％。产物GA终浓度为19.22mM，是野生酶PGUS的5.7倍、AtGUS的2.6倍。
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公开(公告)号：CN109371080A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811196680.3
申请日：2018-10-15
Applicant: 北京理工大学
Abstract: 本发明克隆了来自植物大豆的糖基转移酶基因GmSGT2，并在大肠杆菌中异源表达糖基转移酶GmSGT2。在pH 7.5、温度35℃条件下，以尿苷二磷酸半乳糖为糖基供体，GmSGT2可以转移1分子半乳糖到3-O-葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)和3-O-葡萄糖基甘草次酸(GLMG)，高效合成Gal-GAMG和Gal-GLMG。进一步克隆来自植物大豆的蔗糖合酶基因GmSusy和来自大肠杆菌的UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因GalE，并在大肠杆菌中异源表达蔗糖合酶GmSusy和UDP-葡萄糖-4-差向异构酶GalE。以GmSGT2偶联GmSusy和GalE构建含有UDP循环的多酶体系，在pH 7.0、温度40℃条件下，以尿苷二磷酸及蔗糖为底物，可以转移1分子半乳糖到GAMG和GLMG，实现高效、低成本合成Gal-GAMG和Gal-GLMG。
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