基于结构蛋白基因D117L的CRISPR-LwCas13a侧向流试纸条快速可视化检测非洲猪瘟病毒的方法

    公开(公告)号:CN117025847A

    公开(公告)日:2023-11-10

    申请号:CN202311044438.5

    申请日:2023-08-18

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了基于结构蛋白基因D117L的CRISPR‑LwCas13a侧向流试纸条快速可视化检测非洲猪瘟病毒的方法,首先RPA扩增待测样品的产物经体外转录获得靶标RNA;合成生物素标记的ssRNA探针;建立CRISPR‑LwCas13a反应体系;将靶标RNA加入到反应体系中在室温下进行反应获得反应液;将试纸条插入到反应液中,待试纸条的结合垫区域被反应液完全浸透,取出试纸条根据试纸条上的测试线是否存在金线判断检测结果。本发明使用D117L基因作为检测靶标并结合CRISPR‑Cas13a检测非洲猪瘟病毒,针对p17基因D117L的保守序列设计了特异性crRNA、RPA引物和探针组合,测试RPA‑LwCas13a‑LFS检测方法敏感性和特异性。

    一株NADC34-like猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作平台的构建与应用

    公开(公告)号:CN115992100A

    公开(公告)日:2023-04-21

    申请号:CN202210804949.1

    申请日:2022-07-08

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一株NADC34‑like PRRSV2的反向遗传操作构建的病毒。具体包括以pACY177质粒为载体,利用PCR扩增、酶切连接等方法将NADC34‑like PRRSV2 BJ1805‑2分离株的全基因序列分段连接到载体上,获得BJ1805‑2全长感染性克隆重组质粒(rBJ1805‑2)。体外拯救了感染性克隆病毒rBJ1805‑2,成功搭建了我国首个NADC34‑like PRRSV2毒株感染性克隆平台。本发明还涉及一种构建可适应Marc‑145细胞传代培养NADC34‑like PRRSV2毒株的改造方法。本发明所构建的感染性克隆病毒有良好的体内外增殖效力,接种猪体可以引起特异性病毒血症;具有良好的安全性,接种猪体后不引起发热,更不会引起仔猪死亡。所改造毒株可作为候选毒株用于研制我国首个NADC34‑like PRRSV2特异性疫苗,有利于我国PRRSV疫情的防控。

    猪RIG-I样受体特异性单克隆抗体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN114957477A

    公开(公告)日:2022-08-30

    申请号:CN202210680936.8

    申请日:2022-06-15

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了猪RIG‑I样受体特异性单克隆抗体,该抗体为猪RIG‑I蛋白特异性单克隆抗体、猪MDA5蛋白特异性单克隆抗体和/或猪LGP2蛋白特异性单克隆抗体,所述猪RIG‑I蛋白特异性单克隆抗体由杂交瘤细胞株pRIG‑I mAb产生,所述猪MDA5蛋白特异性单克隆抗体由杂交瘤细胞株pMDA5 mAb产生,所述猪LGP2蛋白特异性单克隆抗体由杂交瘤细胞株pLGP2 mAb A1‑3或杂交瘤细胞株pLGP2 mAb B9‑2产生,所述杂交瘤细胞株pRIG‑I mAb的保藏编号为CCTCC NO:C2022133,所述杂交瘤细胞株pMDA5 mAb的保藏编号为CCTCC NO:C2022134,所述杂交瘤细胞株pLGP2 mAb A1‑3的保藏编号为CCTCC NO:C2022135,所述杂交瘤细胞株pLGP2 mAb B9‑2的保藏编号为CCTCC NO:C2022136。

    表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用

    公开(公告)号:CN114134179A

    公开(公告)日:2022-03-04

    申请号:CN202111514044.2

    申请日:2021-12-13

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种表达G2型猪流行性腹泻病毒S/S1的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒及其应用,属于兽用生物制品技术领域。本发明提供两株重组表达G2型PEDV流行株S或S1基因的PRRSV嵌合病毒。基于PRRSV天然弱毒株感染性克隆平台构建的这两株嵌合病毒,均可诱导猪体同时产生抵抗PEDV和PRRSV的中和抗体。这些嵌合病毒可作为活载体疫苗候选株,用于研制同时抵抗PEDV和PRRSV流行株的新型基因工程疫苗。本发明涉及两株重组表达G2型PEDV流行株S或S1基因的PRRSV嵌合病毒的构建与拯救。这些嵌合病毒为有效防控PED和PRRS疫情提供了新型疫苗候选株和关键技术支持,同时抵抗PEDV和PRRSV流行株的基因工程活疫苗的成功研制可以实现“一针两防”,具有巨大经济价值和良好的市场前景。

    两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用

    公开(公告)号:CN111662885A

    公开(公告)日:2020-09-15

    申请号:CN202010571894.5

    申请日:2020-06-22

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 两株基因组高度同源猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染性克隆构建、拯救与应用,属于生物工程技术领域。本发明所构建的两个感染性克隆病毒是基于HP-PRRSV基因组高度同源但毒力有显著差异的XJ17-5强毒株和JSTZ1712-12天然弱毒株。所构建感染性克隆的方法简单便捷,直接进行DNA转染,不需要体外转录成病毒RNA再转染,克服了RNA体外不稳定和易降解等缺点。所获得HP-PRRSV感染性克隆平台可应用于体外病毒复制机制与致病机理研究。所构建HP-PRRSV天然弱毒株感染性克隆病毒可用于研制更安全高效的新型PRRSV基因工程疫苗,有利于我国PRRSV的防控。

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