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公开(公告)号：CN113552335A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202010446599.7
申请日：2020-05-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/532 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N23/04 , G01N23/20
Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。
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公开(公告)号：CN111820185B
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202010712347.4
申请日：2020-07-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/02
Abstract: 本发明公开了一种IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁方法及其应用，所述扩繁方法为先将购买的IFN–γ基因缺陷杂合子交配，再将其子代中的纯合子和杂合子进行交配，再将子代中的雄性和雌性纯合子交配即可获得大量IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠，实现IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠的扩繁，同时获得的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠较直接购买的IFN–γ基因缺陷纯合子小鼠体质正常，可更好用于隐孢子虫体外感染模型建立，极低剂量即可造成快速、慢性感染，且过程中小鼠死亡率低，可以满足隐孢子虫感染需要较长研究周期的要求。而且扩繁后获得的FN–γ基因缺陷纯合子小鼠可再直接纯纯交配产后代，实现大量扩繁，无需再经过复杂的纯杂交配。
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公开(公告)号：CN118086351B
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118440972A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410507411.3
申请日：2024-04-25
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因的微小隐孢子虫基因敲除虫株及其应用。本发明研究显示CpMuc25基因与虫体毒力相关，作为靶点能用于在筛选或制备抗微小隐孢子虫病的药物；本发明提供一种微小隐孢子虫CpMuc25基因敲除虫株，通过基因编辑技术缺失25kDa黏蛋白CpMuc25基因成功构建得到；在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株敲除CpMuc25基因后，仍然可以体外培养，其体外生长速度减缓，进行体内免疫后，感染后的小鼠临床症状减轻，致死时间滞后，致死率显著降低，具有毒力减弱的优点，能用于制备抗微小隐孢子虫药物预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN118360157A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410336425.3
申请日：2024-03-22
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/11 , C12N15/85 , C12N15/52 , C12N9/22 , C12N15/113 , A61K39/002 , A61P33/02 , C12R1/90
Abstract: 本发明公开了一株弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基基因缺失疫苗虫株及其应用。本发明提供一株弓形虫基因缺失疫苗虫株(Δscsα)，该虫株通过基因编辑技术敲除弓形虫琥珀酰辅酶A合成酶α亚基(TgSCSα)基因得到；弓形虫敲除TgSCSα后在体外仍可培养、在体内具有几乎无毒的特性；动物免疫接种Δscsα后，能够产生良好的免疫保护力，有效抵抗野生型弓形虫的感染。TgSCSα具有作为弓形虫疫苗设计靶点的潜力，能用于制备弓形虫基因缺失疫苗虫株。Δscsα是一株具备良好应用前景的候选疫苗虫株，可以为弓形虫病的防控提供更多选择和策略。
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公开(公告)号：CN118086351A
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202410133765.6
申请日：2024-01-30
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了缺失60kDa糖蛋白基因的微小隐孢子虫基因缺失虫株及其应用。本发明提供一种微小隐孢子虫GP60基因缺失虫株及其构建方法，通过基因编辑技术缺失60kDa糖蛋白GP60基因成功构建微小隐孢子虫基因缺失虫株。研究显示，在野生型微小隐孢子虫IIdA20G1亚型虫株缺失GP60基因后，仍然可以体外培养，其体外生长荷虫量明显降低，并且该基因缺失虫株的毒力减弱，在小鼠体内荷虫量也显著降低，卵囊排泄强度明显减弱，不会造成感染后GKO小鼠死亡，具有毒力显著减弱的优点，能够用于制备微小隐孢子虫弱毒疫苗，用于预防微小隐孢子虫感染。
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公开(公告)号：CN113552335B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN202010446599.7
申请日：2020-05-25
Applicant: 华南农业大学
IPC: G01N33/532 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N23/04 , G01N23/20
Abstract: 本发明公开了一种用于定位隐孢子虫胞内不同寄生时期特异表达蛋白的免疫电镜样品的制备方法。本发明将感染有隐孢子虫卵囊的HCT‑8细胞样品在戊二醛‑多聚甲醛混合固定液中固定，然后经低熔点琼脂糖预包埋，乙醇梯度脱水，LR‑White树脂渗透，包埋，聚合，将样品包埋块超薄切片后进行免疫金标记和重金属染色，即可制得电镜观察用的隐孢子虫样本。通过本发明方法，制备的样品的反应免疫原性良好，隐孢子虫形态良好，结构完整，隐孢子虫的纳虫空泡边缘光滑，可以看清胞内时期的隐孢子虫内部结构的样品，能够为研究胞内寄生时期的隐孢子虫的形态及虫体蛋白的定位，有利于研究隐孢子虫的入侵机制、代谢通路、致病机制，为开发疫苗提供可能。
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公开(公告)号：CN114540508A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202210228164.4
申请日：2022-03-08
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6848 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于牛中常见艾美耳球虫检测和虫种鉴定的巢式PCR方法及试剂盒。本发明采用牛的艾美耳球虫SSU rRNA基因作为检测靶序列，所述序列中具有保守区域和可变区域，相应扩增片段中包含多个单核苷多态性位点；本发明进一步通过设计巢式PCR引物，建立了牛中常见艾美耳球虫巢式PCR检测方法，可检测出不同的牛中常见艾美耳球虫，进行艾美耳球虫的虫种鉴定。采用本发明的检测方法能够最低检测到一个卵囊，其扩增效率高，检测灵敏，可以准确区分牛感染的不同艾美耳球虫，并确定引起发病的不同虫种，用于牛球虫病的精准防控。
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