公开(公告)号：CN113817708A

公开(公告)日：2021-12-21

申请号：CN202111395841.3

申请日：2021-11-23

Applicant: 中国医学科学院北京协和医院 ,  杭州优思达生物技术有限公司

Inventor： 杨启文 ,  朱盈 ,  贾沛瑶 ,  喻玮 ,  林元奎 ,  詹昊 ,  王鑫朝 ,  王炳南 ,  周艳琼 ,  尤其敏 ,  帅金晓 ,  林艺志

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种重组DNA聚合酶及其制备方法和应用，基于野生型DNA聚合酶I进行定点突变，通过逐步筛选，最终获得扩增效率较高的突变型DNA聚合酶。本发明的重组DNA聚合酶的方法是将含突变型DNA聚合酶编码基因的表达载体转化到大肠杆菌中，表达并纯化得到重组DNA聚合酶。通过该技术获得的重组DNA聚合酶相较于现有聚合酶在适用温度、扩增效率、DNA结合能力以及对干扰物的耐受能力均体现明显优势，并可应用于恒温扩增方法中检测核酸，具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113817707A

公开(公告)日：2021-12-21

申请号：CN202111394888.8

申请日：2021-11-23

Applicant: 中国医学科学院北京协和医院 ,  杭州优思达生物技术有限公司

Inventor： 杨启文 ,  朱盈 ,  贾沛瑶 ,  喻玮 ,  林元奎 ,  詹昊 ,  王鑫朝 ,  王炳南 ,  周艳琼 ,  尤其敏 ,  帅金晓 ,  林艺志

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种突变重组逆转录酶及其制备方法和应用，具体突变位点为：将野生型逆转录酶M‑MLV的第67位氨基酸从S突变为T，第303位氨基酸从F突变为R，第312位氨基酸从L突变为S，第432位氨基酸从L突变为G，第479位氨基酸从N突变为F，第524位氨基酸从D突变为Q。该酶是通过人工合成表达载体，利用优选的宿主细胞，经IPTG诱导表达获得。经改造后的一种重组突变型逆转录酶的活性温度为37‑65℃，逆转录效率是野生型逆转录酶的41.9倍，对常见干扰物的耐受能力明显提高。其性能明显优于野生型M‑MLV，并在与市场化M‑MLV的性能比较中显示出优势。