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公开(公告)号：CN102140502A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201010550886.9
申请日：2010-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶酶切、发卡结构连接和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列测定其3′端侧翼未知DNA序列的方法。该方法通过合成一条易形成发卡结构的寡聚核苷酸序列；选用单一限制性内切酶酶切基因组DNA，纯化后与发卡结构连接；利用引物设计软件选定发卡结构序列上的互补序列作为3′端引物、两条靠近未知序列端的已知DNA序列上的特异性序列作为5′端引物；以发卡结构连接物为模板，用设计的引物进行巢式PCR扩增以获取已知DNA序列3′端侧翼的未知序列。本发明具有操作简便、应用范围广、操作限制少、引物特异性强、结果验证简捷、未知序列长度不限和成本低廉等特点。
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