公开(公告)号：CN112195178A

公开(公告)日：2021-01-08

申请号：CN202010984101.2

申请日：2020-09-18

Applicant: 大连理工大学

Inventor： 栾雨时 ,  张媛媛 ,  洪雨慧

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种通过沉默miR394来提高番茄晚疫病抗性的长链非编码RNA‑lncRNA40787，所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该长链非编码RNA的克隆方法：以野生型感晚疫病番茄早粉2号的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD‑18T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序：还提供了该长链非编码RNA的应用方法，用于番茄抵御病原菌侵染，即在番茄中瞬时过表达所述番茄抗晚疫病的长链非编码RNA‑lncRNA40787。本发明得到的长链非编码RNA在番茄瞬时过表达后，番茄miR394的表达量显著降低，其抗晚疫病效果更优：其用于沉默miR394使番茄对晚疫病的抗性增强，对培育抗晚疫病番茄品种，从而提高番茄产量具有重要意义。

公开(公告)号：CN111850032A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN202010562713.2

申请日：2020-06-19

Applicant: 大连理工大学

Inventor： 栾雨时 ,  洪雨慧 ,  贺晓丽 ,  张媛媛

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明涉及番茄转基因材料的构建，旨在提供一种运用CRISPR-Cas9系统同时沉默番茄miR482b和miR482c的基因编辑方法。包括：选择sgRNA靶位点进行克隆，将多个sgRNA表达框架构建到一个载体上，可用于真核表达；将重组质粒转化农杆菌，介导转化番茄愈伤组织获得转基因植株，发苗，获得转基因阳性株系；还提供了利用CRISPR-Cas9系统同时沉默番茄miR482b和miR482c的应用方法，培育抗晚疫病番茄植株。本发明方法得到的转基因植株中miR482b和miR482c的表达量低于野生型植株，其抗晚疫病效果更优。本发明通过沉默miR482b和miR482c基因使番茄对晚疫病的抗性增强，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。

公开(公告)号：CN106754932A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201710172193.2

申请日：2017-03-22

Applicant: 大连理工大学

Inventor： 栾雨时 ,  杨广磊 ,  崔军 ,  姜宁 ,  肖裕

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00

CPC classification number: C12N15/113 ,  C12N15/8205 ,  C12N15/8218 ,  C12N15/8282 ,  C12N2310/10

Abstract: 本发明公开了一种DNA分子STTM‑miR482a，所述DNA分子的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了该DNA分子的应用，将表达DNA分子STTM‑miR482a的重组载体用于调控植物中microRNA482a表达；具体方法为：将所述表达DNA分子STTM‑miR482a的重组载体导入目的植物中，即得到可调控microRNA482a表达的植物。本发明通过抑制野生型番茄中miR482a的表达，得到转基因番茄，其与野生型番茄相比，抗病性增强；本发明对培育抗病的植物品种，从而提高农作物产量具有重要意义。