一种高产羟基酪醇的大肠杆菌构建方法及应用

    公开(公告)号:CN111748508A

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN202010582557.6

    申请日:2020-06-23

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明涉及一种高产羟基酪醇的大肠杆菌构建方法及应用,该方法包括:PCR扩增获取HpaBC、LAAD、ARO10和PAR四种基因;构建质粒pACYC-HpaBC、质粒pET-LAAD-ARO10和质粒pRSF-PAR;将质粒pACYC-HpaBC、质粒pET-LAAD-ARO10和质粒pRSF-PAR共同转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,得到重组大肠杆菌。根据本发明实施例,该方法获得的重组大肠杆菌可高产羟基酪醇,催化过程简单、环保,具有广阔的工业化应用前景。

    生产β,γ型二元醇的大肠杆菌工程菌株及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN119614468A

    公开(公告)日:2025-03-14

    申请号:CN202411551959.4

    申请日:2024-11-01

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋 吴培玲

    Abstract: 本发明涉及一种生产β,γ型二元醇的大肠杆菌工程菌株及其构建方法和应用,该方法通过构建表达苯丙酮酸脱羧酶的基因ARO10的重组质粒pET‑ARO10;构建表达乙酰羟酸合酶的基因ScIlv2的重组质粒pRSF‑ScIlv2c;将所述重组质粒pET‑ARO10和所述重组质粒pRSF‑ScIlv2c导入大肠杆菌中,以获得生产β,γ型二元醇的大肠杆菌工程菌株。该大肠杆菌工程菌株能够生产β,γ型二元醇4‑甲基戊烷‑2,3‑二醇、5‑甲基己烷‑2,3‑二醇、4‑甲基己烷‑2,3‑二醇,实现了β,γ型二元醇在大肠杆菌中的高效合成,可应用于药物、生物燃料、新型聚合物材料等行业。

    一种生产香兰素的酿酒酵母重组菌株及其构建方法

    公开(公告)号:CN115975833B

    公开(公告)日:2024-07-12

    申请号:CN202211313001.2

    申请日:2022-10-25

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋 莫棋文

    Abstract: 本发明涉及一种生产香兰素的酿酒酵母重组菌株及其构建方法,该构建方法包括将酿酒酵母的ADH6基因、ADH7基因、SFA1基因、GRE2基因、HFD1基因、GRE3基因、GCY1基因、YPR1基因、YDL124W基因、ARI1基因、AAD3基因和YDR541C基因进行敲除,获得工程菌株,使所述工程菌株异源表达3‑脱氢莽草酸脱水酶ASBF或AROZ、2‑氧‑甲基转移酶HsOMT、芳香羧酸还原酶CAR和磷酸泛酸转移酶PPTASE,获得酿酒酵母重组菌株。该重组菌株可提高香兰素的纯度和产量,解决酿酒酵母无法生产高纯度香兰素的问题,具有广阔的工业化应用前景。

    一种铜离子诱导的酿酒酵母体内基因扩增的方法及其应用

    公开(公告)号:CN118127059A

    公开(公告)日:2024-06-04

    申请号:CN202410175151.4

    申请日:2024-02-07

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋 王俊逸

    Abstract: 本发明涉及一种铜离子诱导的酿酒酵母体内基因扩增的方法及其应用,该方法包括将酿酒酵母菌中铜离子转运蛋白的启动子替换为铜离子诱导的启动子,获得启动子替换菌株;在所述启动子替换菌株中CUP1基因的终止子区域整合5’额外添加CUP1上游同源序列的外源基因表达模块或整合3’额外添加CUP1下游同源序列的外源基因表达模块,获得重组酿酒酵母菌;将所述重组酿酒酵母菌作为起始菌株,在高浓度铜离子平板上筛选外源基因表达模块高拷贝的进化菌株。实现利用铜离子诱导产生稳定的外源表达模块多拷贝的酵母菌株。

    用于制备麻黄碱的工程菌的构建及麻黄碱的制备方法

    公开(公告)号:CN114150009B

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202010937243.3

    申请日:2020-09-08

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋

    Abstract: 本发明涉及一种用于制备麻黄碱的工程菌的构建及麻黄碱的制备方法,其构建方法包括:向大肠杆菌或酿酒酵母中转化含有羟基扁桃酸合成酶基因HmaS和乙酰羟酸合成酶基因AHAS的重组质粒以及含有扁桃酸脱氢酶基因SMDH和苯甲酰甲酸脱羧酶基因BFD的重组质粒。采用上述方法构建得到的基于质粒的表达工程菌被证实可实现生物合成与制备麻黄碱,具有可规模化的生产、产量高、环境友好等工业应用前景,未来可通过基因组整合相应的基因模块而获得更为稳定的表达菌株,以及可以通过投苯丙氨酸、苯甲醛等补料方式进一步提高产量。

    一种高灵敏度的重组酿酒酵母菌株及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN116445308A

    公开(公告)日:2023-07-18

    申请号:CN202211175274.5

    申请日:2022-09-26

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋 范聪

    Abstract: 本发明涉及一种高灵敏度的重组酿酒酵母菌株及其构建方法和应用,该重组酿酒酵母菌株敲除了酿酒酵母中丝氨酸/苏氨酸细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂Far1、半乳糖诱导系统的负调节因子Gal80和转录激活因子Gal4,并将信息素系统转录激活因子Ste12的DNA结合序列替换为半乳糖诱导系统转录激活因子Gal4的DNA结合序列;后续通过进一步敲除半乳糖激酶Gal1并替换为转录激活因子Gal4得到另一重组菌株,制得重组菌株即有可在感知极低浓度信息素后产生强烈的绿色荧光蛋白信号,也有具备低渗漏、较高的信噪比等特点的类型,可作为检测一些化合物的生物传感器。

    一种生产香兰素的酿酒酵母重组菌株及其构建方法

    公开(公告)号:CN115975833A

    公开(公告)日:2023-04-18

    申请号:CN202211313001.2

    申请日:2022-10-25

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋 莫棋文

    Abstract: 本发明涉及一种生产香兰素的酿酒酵母重组菌株及其构建方法,该构建方法包括将酿酒酵母的ADH6基因、ADH7基因、SFA1基因、GRE2基因、HFD1基因、GRE3基因、GCY1基因、YPR1基因、YDL124W基因、ARI1基因、AAD3基因和YDR541C基因进行敲除,获得工程菌株,使所述工程菌株异源表达3‑脱氢莽草酸脱水酶ASBF或AROZ、2‑氧‑甲基转移酶HsOMT、芳香羧酸还原酶CAR和磷酸泛酸转移酶PPTASE,获得酿酒酵母重组菌株。该重组菌株可提高香兰素的纯度和产量,解决酿酒酵母无法生产高纯度香兰素的问题,具有广阔的工业化应用前景。

    铜离子诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法

    公开(公告)号:CN112375695A

    公开(公告)日:2021-02-19

    申请号:CN202011163198.7

    申请日:2020-10-27

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 袁吉锋

    Abstract: 本发明涉及一种铜离子诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法,其构建方法包括:将酿酒酵母菌中的Gal80启动子替换为内源性CTR3或CTR1铜离子抑制启动子,将酿酒酵母菌中的Gal4启动子替换为内源性CUP1铜离子诱导启动子,以便获得重组酿酒酵母菌。采用上述方法构建得到的酿酒酵母工程菌可利用廉价铜离子作为诱导剂,实现酿酒酵母可控表达蛋白,并且具有较好的菌株稳定性。

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