公开(公告)号：CN114539398A

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202011309014.3

申请日：2020-11-20

Applicant: 南开大学

Inventor： 王硕 ,  胡耀中 ,  陆旸 ,  张川 ,  张博崴

IPC: C07K16/16 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C12N15/70 ,  C12N15/13 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供了一种羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，包括如下步骤：(1)对质粒和质粒载体进行双酶切，将得到的VHH基因片段与质粒载体进行连接形成重组质粒，然后将所述的重组质粒电转化入大肠杆菌感受态细胞中进行纳米抗体的表达，纯化得到的纳米抗体蛋白；(2)双抗夹心ELISA方法的构建：在捕获抗体中加入羽扇豆总蛋白，使其与捕获抗体结合，然后加入检测抗体，鼠抗HA单克隆抗体为一抗，HRP标记的单克隆抗体为二抗，进行显色后即成。本发明所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法基于特异性的纳米抗体，能够开发食品中痕量过敏原的高灵敏快速检测体系，用于食物组分中过敏原检测。

公开(公告)号：CN112505327A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011308988.X

申请日：2020-11-20

Applicant: 南开大学

Inventor： 王硕 ,  胡耀中 ,  吴思浩

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/543 ,  G01N33/53 ,  C07K16/16 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明提供了一种澳洲坚果过敏原Vicilin双抗夹心ELISA方法，包括如下步骤：(1)纳米抗体的制备：将纳米抗体编码基因亚克隆至pHEN6质粒，得到可表达只带有His‑标签纳米抗体的重组质粒，纳米抗体编码基因亚克隆至pMECS质粒，得到可表达带有HA‑标签和His‑标签纳米抗体的重组质粒，将重组质粒分别转化到大肠杆菌中进行标签纳米抗体的周质表达，渗透压冲击裂解细胞提取周质液，通过金属离子亲和层析和尺寸排阻色谱纯化检测用纳米抗体。本发明所述的澳洲坚果过敏原Vicilin双抗夹心ELISA方法基于特异性的纳米抗体，能够开发食品中痕量过敏原的高灵敏快速检测体系。

公开(公告)号：CN112321709A

公开(公告)日：2021-02-05

申请号：CN202011313101.6

申请日：2020-11-20

Applicant: 南开大学

Inventor： 王硕 ,  胡耀中 ,  吴思浩

IPC: C07K16/16 ,  G01N33/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明提供了一种澳洲坚果过敏原Vicilin特异性纳米抗体及其应用，所述的特异性纳米抗体为纳米抗体Nb58、纳米抗体Nb68、纳米抗体Nb81、纳米抗体Nb135、纳米抗体Nb139或纳米抗体Nb181中的至少一种。本发明所述的一种澳洲坚果过敏原Vicilin特异性纳米抗体制备周期短，成本低，稳定性高，可用于免疫检测体系的构建。