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公开(公告)号：CN109609680B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201910045504.8
申请日：2019-01-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明首次公开了一个与黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因紧密连锁的分子标记SSR05793，属于植物分子育种领域。该标记正反向引物序列分别为：5′CCCTCTGCTGCACATTATCC 3′和5′TGCACCAAGCAATAACTTGTC 3′，在RIL(长春密刺×IL52)群体中，标记SSR05793可在抗病单株中扩增出192bp单一条带，在感病单株中扩增出204bp单一条带或192bp和204bp双条带。本发明公开的分子标记SSR05793可用于黄瓜‑酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因精细定位和分子标记辅助育种，对于加快黄瓜细菌性角斑病抗性育种具有重要的理论和实践指导意义。
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公开(公告)号：CN109609680A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910045504.8
申请日：2019-01-16
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明首次公开了一个与黄瓜-酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因紧密连锁的分子标记SSR05793，属于植物分子育种领域。该标记正反向引物序列分别为：5′CCCTCTGCTGCACATTATCC 3′和5′TGCACCAAGCAATAACTTGTC 3′，在RIL(长春密刺×IL52)群体中，标记SSR05793可在抗病单株中扩增出192bp单一条带，在感病单株中扩增出204bp单一条带或192bp和204bp双条带。本发明公开的分子标记SSR05793可用于黄瓜-酸黄瓜渐渗系抗细菌性角斑病基因精细定位和分子标记辅助育种，对于加快黄瓜细菌性角斑病抗性育种具有重要的理论和实践指导意义。
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公开(公告)号：CN104419763B
公开(公告)日：2017-01-18
申请号：CN201310409784.9
申请日：2013-09-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号：CN104789562A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510235861.2
申请日：2015-05-06
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了与单性结实主效QTL Parth2.1连锁的分子标记方法，属于生物技术领域。首先公开了与QTL Parth2.1紧密连锁的分子标记Indel-T-47，同时公开了该标记的引物Indel-T-47F/Indel-T-47R。在含有Parth2.1的分离群体中，该标记与单性结实性显著相关。在含有Parth2.1的全雌自交系材料中，标记引物Indel-T-47F/Indel-T-47R在强单性结实株系中均能扩增出155bp产物，是Parth2.1的峰值标记，与Parth2.1紧密连锁。本发明公开的与Parth2.1紧密连锁分子标记，可用于全雌黄瓜单性结实分子标记辅助育种。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104450878A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410336366.6
申请日：2014-07-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6858 , C12Q2531/113 , C12Q2537/143
Abstract: 本发明甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立，属于生物技术育种领域，专用于甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-1与Gsb-4的聚合育种。通过同时添加引物CMCT505和CMTA170a，并调整DNTPs、Buffer与模板DNA的浓度及退火温度等，设计各影响因素的正交试验，通过对双亲后代F1以及单一PCR体系扩增筛选到的聚合基因幼苗DNA进行鉴定，建立了可以同时扩增出189bp和121bp两个目的条带的双重SSR-PCR体系。该双重PCR体系具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，特别是节省珍贵的实验材料。对甜瓜乃至整个蔬菜作物的聚合育种实践和理论研究具有重要的借鉴意义。
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公开(公告)号：CN104419763A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310409784.9
申请日：2013-09-11
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6841 , C12Q2543/10 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
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公开(公告)号：CN103114151A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310081001.9
申请日：2013-03-14
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光原位杂交的方法，以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片，在80℃的70％去离子甲酰胺中变性，梯度酒精中脱水干燥；采用碱裂解法提取目标质粒DNA，利用缺刻平移法进行标记，配制杂交混合液，90℃变性后，加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交，最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术，可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制，由于其一次性可加入多个探针，避免了对一张制片多次重复杂交，大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA，用于封阻杂信号和重复序列信号，提高了靶信号的辨识率，增加了实验结果的准确性。
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公开(公告)号：CN102845300A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210254561.5
申请日：2012-07-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合方法及其鉴定专用于甜瓜抗蔓枯病聚合抗源筛选以及抗蔓枯病标记辅助聚合育种研究。两个抗蔓枯病材料PI420145和PI482398杂交、后代连续自交得到抗蔓枯病基因稳定遗传的F4，F4聚合了PI420145和PI482398的抗蔓枯病基因，且聚合后抗源的聚合抗源的抗性增强，抗性高于亲本。PI420145和PI482398杂交及自交后代F4聚合双亲的蔓枯病抗性基因，该抗源的蔓枯病抗性基因与AFLP标记EcoRI-TG/MseI-CTC200，EcoRI-AT/MseI-CTG90，EcoRI-TC/MseI-CAG60连锁，同时SSR标记CMAT170a连锁。通过本发明提供的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合及其鉴定方法，获得聚合基因材料，其抗性高于单一抗源，大大提高抗蔓枯病甜瓜的选择效率，在甜瓜抗蔓枯病育种中，该聚合抗源可做为供体亲本，能够加速甜瓜抗蔓枯病育种进程。
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