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公开(公告)号：CN113801888B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202111087629.0
申请日：2021-09-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了用于提高枯草芽孢杆菌自发突变频率的质粒。所述选自pUS20D9M,pUS20XP1以及pUS20XP2中的任意一个；其中，质粒pUS20D9M序列如SEQ ID NO.1所示，质粒pUS20XP1序列如SEQ ID NO.2所示，质粒pUS20XP2序列如SEQ ID NO.3所示。枯草杆菌是一种重要的微生物。很多育种工作需要提高枯草杆菌的基因突变频率。然而，目前尚缺乏理想的控制枯草杆菌自发突变频率的方法。本发明借助CRISPRi技术和过表达易错型DNA聚合酶的方法，提高宿主的自发突变频率(最高达5128倍)。整个操作可通过质粒的转化和消除实现，无需对宿主进行基因敲除。
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公开(公告)号：CN116286932A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202210957133.2
申请日：2022-08-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/75 , C12N15/62 , C12N1/21 , C07K14/435 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/22 , C12P21/06 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了用于在枯草芽孢杆菌中分泌贻贝粘附蛋白的方法。贻贝粘附蛋白具有很好的应用价值，但天然来源的贻贝粘附蛋白产量极低，而异源表达时，贻贝粘附蛋白又难以被分泌至细胞外。鉴于此，本发明使用来自大肠杆菌中的伴侣蛋白Spy介导贻贝粘附蛋白分泌表达，实现了贻贝粘附蛋白Mfp3和Mfp5在食品级宿主枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达。
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公开(公告)号：CN115948395A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211012342.6
申请日：2022-08-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种人工改造的木糖诱导型启动子及其在枯草杆菌中的应用。枯草芽孢杆菌中依然缺乏性能优良的诱导型启动子，本专利以源于枯草芽孢杆菌的木糖启动子Pxyl为出发序列，通过‑35区和‑10区的改造、mRNA稳定性序列的添加以及操作子的随机突变等操作，获得一个新的性能优秀的木糖诱导型启动子Pxyl4。Pxyl4兼具诱导表达强度高和本底表达水平低的优点(诱导与非诱导情况下落差超过700倍)；相对于出发启动子Pxyl，Pxyl4在诱导条件下的强度提高了30倍以上。Pxyl4可用于枯草芽孢杆菌中基因表达调控或蛋白高效合成。
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公开(公告)号：CN115717151A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211069296.3
申请日：2022-09-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 有机磷农药降解酶MPH在去除有机磷农药残留方面有很好的应用潜力，但该酶还未实现高效生产。鉴于此，本发明将来源于菌株Pseudomonas sp.M6的MPH编码基因(mpd)进行密码子优化，然后将优化后的基因连同其他表达元件整合到枯草芽孢杆菌的染色体上，构建了高效合成MPH的基因工程菌。该工程菌无任何抗生素抗性基因残留，且合成的MPH被分泌至细胞外，产量达工业生产标准。
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公开(公告)号：CN111440754B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202010194553.0
申请日：2020-03-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用基因工程改造的甲烷氧化菌消除土壤中有机污染物残留的方法。一种基因工程菌，该基因工程菌以甲烷氧化菌为宿主,通过基因工程手段导入了某有机污染物降解酶基因。本发明借助基因工程手段将编码污染物降解酶的基因导入该菌株中，并通过优化转录和翻译元件使该基因功能性表达，从而赋予菌株分解目标污染物的能力。本发明首先利用基因工程手段将编码污染物降解酶基因导入甲烷氧化菌中，赋予这些菌株分解有机污染物的能力；然后将一定量的工程菌混合到污染土壤中，并通过提供充足的甲烷来促进工程菌的存活和繁殖，从而有效分解污染物。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109929785B
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN201910324169.5
申请日：2019-04-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N1/20 , A62D3/02 , C12R1/32 , A62D101/28
Abstract: 本发明公开了一株能够降解2,6‑二甲基苯酚的细菌及其生产的菌剂。经鉴定该降解菌株B5‑4为一株生物安全性较好的新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)，已保藏于典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2019088。本发明所述菌株可用于2,6‑二甲基苯酚的降解，24h内可完全降解50mg·L‑1的2,6‑二甲基苯酚；72h内对浓度在1～300mg·L‑1的2,6‑二甲基苯酚的降解率高达99％以上；短时间内可将土壤中的2,6‑二甲基苯酚残留量降低99％，该菌株可用于清除环境中2,6‑二甲基苯酚残留污染。
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公开(公告)号：CN113604484A
公开(公告)日：2021-11-05
申请号：CN202110071042.4
申请日：2021-01-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了单加氧酶MpdA及其编码基因mpdA以及二者在维生素E前体合成中的应用。MpdA的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，全长413个氨基酸，其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，全长1242bp。MpdA是首次发现的可以催化2,3,6‑三甲基苯酚转化形成维生素E前体2,3,5‑三甲基氢醌的单加氧酶。含有MpdA的工程菌细胞或酶液可高效地将2,3,6‑三甲基苯酚转化为2,3,5‑三甲基氢醌。2,3,5‑三甲基氢醌是维生素E合成的两个前体之一，2,3,6‑三甲基苯酚单加氧酶MpdA与其编码基因mpdA在生物法合成维生素E前体2,3,5‑三甲基氢醌中的应用潜力巨大。
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公开(公告)号：CN113025641A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110355936.6
申请日：2021-04-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种将DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体的方法及其应用。一种组合物，由选自转座子元件或含有该转座子元件的质粒和质粒pUSIGH组成。该组合物在把目标DNA片段随机插入枯草芽孢杆菌染色体中的应用。将组合物共同转化到枯草芽孢杆菌中后，转座子元件或含有该转座子元件的质粒会通过同源重组将转座子元件整合到宿主染色体中，pUSIGH可在宿主内正常独立复制。用木糖诱导pUSIGH上的转座酶基因表达，在转座酶的作用下转座子随机插入到染色体上；进而可筛选出目标蛋白表达水平较高的克隆。
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公开(公告)号：CN111440754A
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN202010194553.0
申请日：2020-03-19
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用基因工程改造的甲烷氧化菌消除土壤中有机污染物残留的方法。一种基因工程菌，该基因工程菌以甲烷氧化菌为宿主,通过基因工程手段导入了某有机污染物降解酶基因。本发明借助基因工程手段将编码污染物降解酶的基因导入该菌株中，并通过优化转录和翻译元件使该基因功能性表达，从而赋予菌株分解目标污染物的能力。本发明首先利用基因工程手段将编码污染物降解酶基因导入甲烷氧化菌中，赋予这些菌株分解有机污染物的能力；然后将一定量的工程菌混合到污染土壤中，并通过提供充足的甲烷来促进工程菌的存活和繁殖，从而有效分解污染物。
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公开(公告)号：CN107699523A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201711069143.8
申请日：2017-11-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于环境污染生物修复领域，公开了一株能够稳定降解杀虫剂噻嗪酮和联苯菊酯的细菌及其生产的菌剂，2017年9月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO.M 2017537。该菌株为革兰氏染色阳性菌株D-6，经鉴定为红球菌属(Rhodococcus sp.)。本发明所述的所述的降解菌株D-6可用于噻嗪酮和联苯菊酯杀虫剂的降解，使用本菌剂可在短时间内使土壤中的噻嗪酮的残留量降低95％以上，在一定时间内使土壤中的联苯菊酯的残留量降低70％以上，其降解性状相比于已报道的降解菌株Rhodococcus sp.YL-1更加稳定，可用于清除环境中的噻嗪酮和联苯菊酯残留污染。
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