公开(公告)号：CN119529068B

公开(公告)日：2025-03-28

申请号：CN202510096614.2

申请日：2025-01-22

Applicant: 南京农业大学三亚研究院

Inventor： 郑龙三 ,  钱莺娟 ,  吴晓东 ,  苗雨润

IPC: C07K16/08 ,  C12N5/20 ,  A61K39/40 ,  A61P31/20 ,  C07K14/01 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明属于兽医生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟病毒I73R蛋白单克隆抗体制备方法与应用。其主要技术包括以原核表达制备的重组I73R蛋白为抗原，免疫BALB/c小鼠，然后利用杂交瘤技术，经过细胞融合、间接ELISA方法筛选、有限稀释法亚克隆、杂交瘤连续传代培养，获得了一株可以稳定分泌抗非洲猪瘟病毒I73R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，本发明也公开了所制备单克隆抗体免疫原的序列、单克隆抗体的亚型、CDR序列、单克隆抗体识别的抗原表位、杂交瘤细胞株的保藏号及单克隆抗体在Western Blot实验、间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验、中和实验及检测猪血清中非洲猪瘟病毒抗体的阻断ELISA方法中的应用。

公开(公告)号：CN117487761A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311239439.5

申请日：2023-09-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  鲍晨沂

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/38 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及表达Cre基因猪骨髓巨噬细胞系的构建方法及其应用；发明所述的方法包含电穿孔原代猪骨髓巨噬细胞引入SV40LT基因使其永生化的方法，在该细胞上继续构建稳定表达Cre基因的猪骨髓巨噬细胞系的方法和利用该细胞系去除基因缺失重组病毒中筛选标记基因的方法。本发明采用的方法是将含有SV40LT基因的转座子系统，以电穿孔的方式引入原代猪骨髓巨噬细胞，筛选出优质的永生化猪骨髓巨噬细胞。在该永生化的猪骨髓巨噬细胞上继续电穿孔引入Cre基因使其稳定表达Cre蛋白，可在构建基因缺失疫苗过程中切除筛选标记基因中应用。

公开(公告)号：CN117487760A

公开(公告)日：2024-02-02

申请号：CN202311239432.3

申请日：2023-09-25

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  鲍晨沂

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  C12N15/12 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，一种猪骨髓巨噬细胞及其构建方法、应用；所述的方法包含电穿孔原代猪骨髓巨噬细胞引入pTERT、pCDK4(R24C)和pCCND1基因使其永生化的方法，在该细胞上继续构建稳定表达Cre基因的猪骨髓巨噬细胞系的方法和利用该细胞系去除基因缺失重组毒株上筛选标记基因的方法。本发明采用的方法是将分别含有pTERT、pCDK4(R24C)和pCCND1的转座子载体和转座酶载体，以电穿孔的方式引入原代猪骨髓巨噬细胞，筛选出永生化猪骨髓巨噬细胞。在永生化的猪骨髓巨噬细胞上继续电穿孔引入Cre基因使其稳定表达Cre蛋白，可在构建基因缺失重组毒株过程中切除筛选标记基因中应用。

公开(公告)号：CN108524514B

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN201810744926.X

申请日：2018-07-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  陈新 ,  薄宗义

IPC: A61K31/475 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了利血平在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的用途，所述利血平的质量百分比含量不低于99.40％，其应用剂量为1‑10μM/L；利血平用于抗猪流行性腹泻病毒效果非常显著，安全、毒副作用少，药物残留低且无污染。

公开(公告)号：CN108524476B

公开(公告)日：2020-07-24

申请号：CN201810746390.5

申请日：2018-07-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 钱莺娟 ,  郑龙三 ,  陈新 ,  薄宗义

IPC: A61K31/12 ,  A61P1/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了黄腐酚在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的用途，所述黄腐酚的质量百分比含量不低于99.75％，其应用剂量为1‑10μM/L；黄腐酚用于抗猪流行性腹泻病毒效果非常显著，安全、毒副作用少，药物残留低且无污染。

公开(公告)号：CN110734990A

公开(公告)日：2020-01-31

申请号：CN201911086292.4

申请日：2019-11-08

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 薛峰 ,  陈诗胜 ,  戴建君 ,  陈伟 ,  钱莺娟 ,  蒋原 ,  苏静 ,  张正荣 ,  曾德新 ,  任建鸾 ,  汤芳

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6804 ,  C12Q1/14 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种检测试剂、试剂盒及其应用。所述检测试剂包括如下四个引物对中的任意一种或多种的组合，所述四个引物对包括：第一引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示的第一引物、第二引物；第二引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示的第三引物、第四引物；第三引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示的第五引物、第六引物；第四引物对，包括序列分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示的第七引物、第八引物。本发明提供的检测方法是以标记的特异性引物扩增适当长度的基因片段，能够保证检测的高度特异性，提高了检测结果的准确性。

公开(公告)号：CN106420695A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610824663.4

申请日：2016-09-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 郇长超 ,  茅翔 ,  钱莺娟

IPC: A61K31/352 ,  A61P1/12 ,  A61P31/14

CPC classification number: A61K31/352

Abstract: 本发明主要涉及一个具有抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)活性药物甘草素在抗猪流行性腹泻病毒HLJBY株感染宿主细胞的活性，属于抗病毒应用领域。该药物甘草素是中药甘草的提取物，可有效的抑制猪流行性腹泻病毒的入胞和复制，从而有效地抑制PEDV的感染。在Vero细胞上证实甘草素主要通过抑制病毒的入胞和复制而起到抗病毒效果。