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公开(公告)号：CN105400745A
公开(公告)日：2016-03-16
申请号：CN201510886074.4
申请日：2015-12-04
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒基因工程毒株及灭活疫苗和疫苗的制备方法，毒株是通过对高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）毒株进行定点突变，使其GP5第35位和第44位的糖基化位点缺失的方式构建而成；灭活疫苗的有效成分为灭活的该毒株病毒液。本发明首次采用过氧化氢为灭活剂，通过过氧化氢灭活浓度、时间优化和免疫佐剂的优化获得新型灭活疫苗。与其他灭活剂和佐剂相比，该毒株制备的新型灭活疫苗可以有效诱导仔猪产生PRRSV细胞免疫应答和中和抗体，保护仔猪抵抗PRRSV强毒攻击的效果更好。该基因工程灭活疫苗比传统灭活疫苗更为有效，相比商品化的PRRSV活疫苗更为安全，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN102321638A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110262408.2
申请日：2011-09-06
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，公开了一种新的猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5修饰基因及其应用。猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5修饰基因，序列如SEQ IDNO.2、SEQ IDNO.3、SEQ IDNO.4或SEQ IDNO.5所示。含有该猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5修饰基因的重组质粒。含有所述的重组质粒的减毒沙门氏菌SL-pCI-SynGP5/GP4-5。结果显示所构建的重组质粒能够诱导产生较高水平的体液免疫应答、淋巴细胞增殖应答以及细胞因子应答。重组沙门氏菌能够诱导较高水平的抗体应答；诱导较高水平的干扰素；病毒血症水平低；攻毒后组织器官的损伤比较轻微，生物安全水平高。
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公开(公告)号：CN101948515A
公开(公告)日：2011-01-19
申请号：CN201010278518.3
申请日：2010-09-10
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/08 , C12N15/40 , C12N15/63 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP7蛋白的表达和ELISA抗体的检测方法，属于高新生物技术领域。以纯化的PRRSV重组NSP7蛋白作为包被抗原，通过一系列反应条件优化，建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该抗原与猪瘟、猪口蹄疫、猪脑心肌炎、猪伪狂犬(PRV)和猪2型圆环病毒阳性血清反应呈阴性，该方法特异性良好，具有较好的特异性和重复性。应用本方法对30份血清样品进行检测，检测结果与IDEXX和韩国JENO公司的VDPro试剂盒符合率分别为为93.3％和90％。表明本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性，适于大规模检测PRRSV血清抗体的流行病学调查。
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公开(公告)号：CN1800375A
公开(公告)日：2006-07-12
申请号：CN200510022550.4
申请日：2005-12-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/33 , A61K39/235
Abstract: 本发明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪2型圆环病毒(PCV－2)串联基因重组腺病毒及疫苗属于高新生物技术领域。通过PCR技术把Cap蛋白基因按照开放式阅读框规则克隆入质粒载体pShuttle－CMV－GP5中，与骨架载体pAdEasy－1共转化大肠杆菌BJ5183菌株获得重组质粒，用重组质粒转染HEK293－A细胞获得了重组腺病毒并进行了纯化，证明构建成功表达了PRRSV GP5蛋白和PCV－2 Cap蛋白的重组腺病毒rAd－Cap－GP5。在该重组毒中可以使蛋白表达提前和表达量提高，能更有效的刺激机体对这两种病的免疫保护反应。这种重组腺病毒疫苗具有亚单位疫苗的安全性和能够采取多种免疫方式，能够刺激机体全方位的免疫应答，从而具有广泛的开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN1554766A
公开(公告)日：2004-12-15
申请号：CN200310112770.7
申请日：2003-12-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/861 , C12N7/08 , C12N15/09 , C12N15/33 , C12N15/85 , A61K39/235 , A61K48/00
Abstract: 本发明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒和疫苗属于高新生物技术领域。通过RT－PCR技术扩增PRRSV GP5全基因序列，并把该基因序列克隆入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle－CMV中，与腺病毒载体系统的骨架载体pAdEasy－1共转化大肠杆菌BJ5183菌株获得重组质粒，重组质粒转染HEK293－A细胞获得了重组腺病毒并成功的进行了噬斑纯化，通过RT－PCR和间接免疫荧光技术证明构建成功表达了PRRSV GP5蛋白的重组腺病毒rAd－GP5。在该重组毒中可以使PRRSV的GP5蛋白表达提前和表达量提高，能更有效的刺激机体的免疫保护反应。这种重组腺病毒疫苗具有亚单位疫苗的安全性和弱毒疫苗的抗原增殖能力，能够刺激机体全方位的免疫应答，从而具有广泛的开发和应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117467698A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202311218111.5
申请日：2023-09-20
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型的重组质粒及其应用，所述重组质粒为将序列为：SEQ ID No.1的基因序列通过EcoRI和SpeI酶切位点克隆入pBluescript SK载体所得的重组质粒。本发明的重组质粒可在PK‑15细胞中获得成功拯救并能进行连续传代，同时重组PCV3病毒和阳性PCV3病料中的PCV3野毒生物学特性相同，接种细胞后都不能在PK‑15细胞内增殖，重组病毒的构建成功为开展猪体感染实验和后续开发疫苗提供了不可或缺的生物材料，突破了猪体感染实验和疫苗等免疫制剂的开发瓶颈。
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公开(公告)号：CN110613706B
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN201910951121.7
申请日：2019-10-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种拮抗猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的药物及其应用，本研究采用病毒感染试验，从386种植物来源的天然药物库中首次发现一种PRRSV拮抗药物—黄腐酚(Xanthohumol，Xn)。该药物在Marc‑145和PAM细胞上均可有效抑制PRRSV复制。人工合成5种不同分子结构的黄腐酚衍生物，病毒感染试验进一步发现，该药物衍生物Xn‑4体外抑制该病毒复制作用最强。仔猪人工感染和药物治疗试验结果显示，Xn‑4能够有效地抑制PRRSV病毒血症，减轻感染猪临床症状，显著降低肺部炎症和病理损伤。综合上述结果，证明该药物对猪繁殖与呼吸综合征具有重要预防和治疗作用，有重要应用前景。
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公开(公告)号：CN113980908A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111065245.9
申请日：2021-09-11
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
IPC: C12N5/20 , C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一株胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白制备的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体以及制备的用于检测胸膜肺炎放线杆菌的阻断ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被酶标版，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为：CCTCCNO:C2021112，所述胸膜肺炎放线杆菌ApxIV蛋白单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株所分泌，所述包被酶标板以ApxIV蛋白作为包被抗原。本发明的试剂盒以阻断ELISA法为原理，检测胸膜肺炎放线杆菌，具有灵敏性和特异性高，重复性好，检测快速方便，易于标准化等优点，非常方便。
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公开(公告)号：CN105648116A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610113660.X
申请日：2016-02-29
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明涉及生物毒株鉴别技术领域，特别涉及一种猪伪狂犬病毒变异毒株的PCR鉴别方法，提取待鉴别病毒DNA，进行第一步扩增，扩增出两条条带的为变异株或HB98疫苗毒株，扩增出1条条带的为经典毒株；扩增出两条条带的病毒DNA再进行第二步扩增，扩增产物分子量大小为293bp的为变异株,扩增产物分子量大小为239bp的为HB98疫苗毒株。第一步PCR的敏感度可以达到2-20TCID50病毒量或0.5ng/ml质粒量，而第二步PCR敏感度达到50TCID50病毒量或者100ng/ml质粒量。该敏感度可以有效的检测出临床病料中是否有伪狂犬病毒感染，并区分出伪狂犬病毒经典毒株或者变异毒株感染，并且准确率高。
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公开(公告)号：CN116813716A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310431720.2
申请日：2023-04-21
Applicant: 南京农业大学 , 江苏南农高科技股份有限公司
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/535 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒3型Cap蛋白的重组蛋白、单克隆抗体及应用，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQNO.1；所述杂交瘤细胞用于生产针对猪圆环病毒3型Cap蛋白的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCNO：C2022379；所述HRP酶标单抗由如上述的单克隆抗体通过HRP酶标制得，所述阻断ELISA方法为使用上述的重组蛋白进行抗原包被，所述阻断ELISA方法使用上述的HRP酶标单抗进行检测抗体作用。本发明的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率，可用于后期进行PCV3抗体的检测，为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供了技术支持。
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