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公开(公告)号：CN112899294A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110155858.5
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
Abstract: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对，筛选有较高同源性的序列，去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽，通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证，收集其细胞培养液进行酶活分析，比较其酶活力，选择最优的HG27基因，检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而，获得了一种多功能酶基因HG27，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备，食品和药品行业等领域应用，以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN110846336B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN113088529B
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202110638095.X
申请日：2021-06-08
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23L33/00 , A23K20/189 , A01K67/027
Abstract: 本发明通过高膳食纤维饲料诱导，取竹鼠盲肠、结肠食糜，分离其微生物总RNA，通过宏转录组学分析筛选糖苷水解酶基因，获得有表达β‑葡聚糖酶功能的新型β‑葡聚糖酶基因HG278，该基因编码的β‑葡聚糖酶在pH3.0~8.0酶活力呈锯齿形变化，对胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶具有较高的耐受力，非常适合在猪胃肠道中发挥功能，是一种良好的饲料和食品，亦可用于制备用于改善胃肠道内环境、药品、食品、保健品等用途的酶制剂，具有较广泛的用途。
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公开(公告)号：CN112852845B
公开(公告)日：2022-07-15
申请号：CN202110156059.X
申请日：2021-02-04
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23K20/189 , A23K50/75 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种新型多功能酶基因HG32及应用，该酶来源于中华竹鼠肠道微生物，能够兼容真核生物细胞表达系统，表达高生物活性的纤维素酶，其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备、食品和药品行业等领域应用，以解决植物纤维素难降解、饲料营养利用率低等问题，减轻动物排泄物中氮和、有机物等污染问题。本发明通过对竹鼠肠道微生物宏转录组测序，序列拼接，与NCBI上已有的糖苷水解酶家族进行同源性对比，筛选高表达的、同源性高于50％的疑似纤维素酶的基因，预测其信号肽，并用猪腮腺分泌蛋白信号肽替换原有的信号肽，按猪密码子偏好优化后克隆到真核表达载体上，通过脂质体转染到猪肾上皮细胞中表达，收集细胞培养上清液进行酶活分析比较后获得。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111394393B
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN202010116317.7
申请日：2020-02-25
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了通过筛选出可以提高基因组定点整合效率的抑制剂，包括组蛋白去乙酰化酶抑制剂或JAK抑制剂中的至少一种。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以在基因组定点整合时，抑制组蛋白的去乙酰化，而促进组蛋白的乙酰化，进而有利于DNA与组蛋白八聚体的解离，核小体结构松弛，从而使各种转录因子和协同转录因子能与DNA结合位点特异性结合，激活基因的转录及定点整合效率。JAK抑制剂通过抑制细胞JAK自发性磷酸化，影响其与STAT蛋白结合，使STAT转录因子磷酸化不能有效转移至细胞核内，影响非DNA连接因子的结合，有利于NHEJ/HDR因子的结合，进而有效增加基因整合至基因组的概率，提高基因组定点整合效率。
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公开(公告)号：CN108285906A
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/85 , A01K67/0275 , A01K2227/108 , A01K2267/02
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN103966188B
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201410161721.0
申请日：2014-04-22
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶及其重组方法和应用。所述可在动物细胞表达分泌的重组葡聚糖酶的核苷酸序列为SEQ ID No:1或SEQ ID No:3。所述重组葡聚糖酶是经过对微生物源基因进行密码子改造和信号肽替换，筛选到适合在动物细胞表达分泌的2个葡聚糖酶基因；经对该两个基因重组改造，获得两个可在动物细胞表达分泌新的重组酶。本发明获得的两个全新的重组β-葡聚糖酶pBgA3pEG和pBg2ApEG可在动物细胞表达分泌，具有更宽pH适应性和耐受性，不但可以用于动物饲料酶制剂开发，同时可以用于转基因动物生产。
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公开(公告)号：CN103695451B
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201310343271.2
申请日：2013-08-07
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种唾液腺组织特异性表达外源蛋白的转基因载体及其构建方法，所述表达载体是通过将葡聚糖酶基因、木聚糖酶基因、以及植酸酶基因构建重组的融合基因插入到腮腺组织特异性的转基因载体中构建得到的；将该载体导入猪的基因组，并采用体细胞核移植技术生产出转基因猪。本发明针对大麦原料葡聚糖酶，小麦、玉米中木聚糖酶，和植物性饲料中的植酸酶都有水解作用，利用猪唾液腺做为反应器，终生分泌，达到永久代替饲料中这些酶制剂的添加，更好的发挥这些酶的作用；本发明的表达载体具有piggyBac转座子，极大地提高了转基因效率，且将普通质粒串联重组的转基因整合模式变成了单位点单拷贝整合，更好的模拟生物基因的内环境。
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公开(公告)号：CN104946581A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510210334.6
申请日：2015-04-28
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β-巯基乙醇 。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。
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