公开(公告)号：CN113528678B

公开(公告)日：2021-12-24

申请号：CN202111077375.4

申请日：2021-09-15

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王永林 ,  武瑾 ,  唐晨 ,  尹康权 ,  李学武

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种用于检测松材线虫的gRNA，包含a)向导序列例如SEQ ID NO:1，其能够杂交至靶核苷酸序列，和b)与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段。本发明还公开了一种用于检测松材线虫的试剂盒，包含所述的gRNA或可转录为所述gRNA的DNA。本发明还公开了载体系统，其包含一种或多种载体，所述载体包含：第一调控元件和第二调控元件，所述第一调控元件可操作地连接至编码Cas核酸酶的核苷酸片段，所述第二调控元件可操作地连接至编码所述gRNA的核苷酸片段。

公开(公告)号：CN113678840A

公开(公告)日：2021-11-23

申请号：CN202110988040.1

申请日：2021-08-26

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王永林 ,  李奇岩 ,  郭瑞峰 ,  唐晨 ,  宋立州 ,  田呈明 ,  李学武

IPC: A01N47/38 ,  A01N47/18 ,  A01N63/22 ,  A01P3/00 ,  A01G13/00

Abstract: 本发明涉及林业病害防治技术领域，具体而言，涉及一种防治黄栌枯萎病的方法，包括以下步骤，对黄栌植株的根部施加第一抗黄栌枯萎病药剂；以及对黄栌植株的树干注射第二抗黄栌枯萎病药剂；所述第一抗黄栌枯萎病药剂为枯草芽孢杆菌溶液，所述第二抗黄栌枯萎病药剂为咪鲜胺溶液或多菌灵溶液。相比较单一的防治方法，本发明提供的防治黄栌枯萎病的方法，具有更佳的防治效果。

公开(公告)号：CN113512596A

公开(公告)日：2021-10-19

申请号：CN202111077374.X

申请日：2021-09-15

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王永林 ,  唐晨 ,  武瑾 ,  尹康权 ,  李学武 ,  宗世祥

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种用于检测松材线虫的crRNA，包含a)向导序列例如SEQ ID NO:1~2中的至少一种，其能够杂交至靶RNA序列，和b)与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段。本发明还公开了一种用于检测松材线虫的试剂盒，包含所述的crRNA或可转录为所述crRNA的DNA。

公开(公告)号：CN106399133B

公开(公告)日：2019-10-18

申请号：CN201610821907.3

申请日：2016-09-13

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 田呈明 ,  熊典广 ,  王永林 ,  邓成霖

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/80 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一株敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株、其构建方法及其应用，并评估了该突变体菌株在大丽轮枝菌基因功能研究中的适用性。本发明构建VdKu80基因敲除载体片段，通过PEG介导的原生质体遗传转化，从转化子中筛选并鉴定得到单拷贝敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株VdXS11‑△VdKu80。本发明的敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株在生长速率、菌落形态、压力响应、分生孢子产量、微菌核形成和致病性表型与野生型菌株无显著差异。使用本发明的突变体菌株作为受体菌株进行基因敲除，其基因敲除率比野生型菌株提高了20％以上，因此能够作为受体菌株对大丽轮枝菌其他基因进行敲除实验。

公开(公告)号：CN117363792A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202311676063.4

申请日：2023-12-08

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 王永林 ,  陈琦 ,  武瑾 ,  唐晨

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种基于RPA‑CRISPR双重检测大丽轮枝菌的方法及应用。本发明通过对大丽轮枝菌的落叶型和非落叶型特异性基因进行研究分析，首次提出基于RPA‑CRISPR系统的大丽轮枝菌致病型双重检测方法，设计并筛选符合检测要求的RPA引物组、crRNA序列，通过双重检测手段实现了对大丽轮枝菌致病型的简便、快速、准确、灵敏检测。

公开(公告)号：CN115786536A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211371530.8

申请日：2022-11-03

Applicant: 北京林业大学 ,  北京蓝狐天敌技术有限公司

Inventor： 王永林 ,  武瑾 ,  唐晨 ,  任利利 ,  王晓旭 ,  马润国

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种用于松材线虫的核酸检测系统及松材线虫核酸检测方法。本发明所述核酸检测系统中，每20μL体系包括：47.5‑52.5nM CRISPR/Cas12a蛋白；50‑100nM crRNA；12.5‑250nM单链DNA荧光信号报告分子；靶标样品；DEPC水；所述靶标样品的生物来源为松材线虫。本发明提供的用于松材线虫的核酸检测系统可以在45min内实现对0.01头线虫/100mg木屑的检测，为实际林业诊断和实验室研究提供了高效、准确、稳定的检测手段，对松材线虫早期监测诊断与防控具有重要意义。

公开(公告)号：CN105985914A

公开(公告)日：2016-10-05

申请号：CN201610584205.8

申请日：2016-07-22

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 梁英梅 ,  刘玲玲 ,  王永林 ,  田呈明

IPC: C12N1/14 ,  C12N15/87 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12N1/14 ,  C12N15/87

Abstract: 本发明提供了一种杨树腐烂病病原菌原生质体的制备及其遗传转化的方法，属于分子植物病理学领域。原生质体的制备方法包括将杨树腐烂病菌接种到YEPD液体培养基中进行菌丝培养，然后将杨树腐烂病菌菌丝进行酶解处理，即得。且利用PEG介导的方法对制备的原生质体进行遗传转化，获得突变体。本发明方法制备原生质体效率高，酶解后的原生质体可高达108‑109个/mL，其转化效率高，原生质体的活性高，而且本方法成本低，操作简单，提高转化效率，大大缩短研究时间。该方法的建立不但为今后杨树腐烂病菌的分子生物学研究奠定了一个良好的基础，而且对杨树腐烂病菌的防治、组织病理学的研究也均存在潜在的利用价值。