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公开(公告)号：CN111057145A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT-PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc-145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN117487006B
公开(公告)日：2024-04-12
申请号：CN202311839446.9
申请日：2023-12-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心
IPC: C07K16/10 , C07K14/085 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K39/125 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种抗A型塞内卡病毒的单克隆抗体以及抗原表位及应用，属于生物抗体技术领域。本发明为了提供一种能够特异性识别SVA VP2蛋白的抗体序列，及该抗体识别的抗原位点序列。本发明提供一株抗A型塞内卡病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。为进一步合理设计表位疫苗，开发SVA感染特异性血清学诊断方法提供依据。
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公开(公告)号：CN117487006A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311839446.9
申请日：2023-12-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心
IPC: C07K16/10 , C07K14/085 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K39/125 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种抗A型塞内卡病毒的单克隆抗体以及抗原表位及应用，属于生物抗体技术领域。本发明为了提供一种能够特异性识别SVA VP2蛋白的抗体序列，及该抗体识别的抗原位点序列。本发明提供一株抗A型塞内卡病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。为进一步合理设计表位疫苗，开发SVA感染特异性血清学诊断方法提供依据。
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公开(公告)号：CN111187781B
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN116444682A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310342828.4
申请日：2023-03-31
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/395 , A61K39/385 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体及其应用。所述的生物型蛋白降解靶向嵌合体由1至多个PRRSVnsp9纳米抗体nsp9nb及/或nsp2纳米抗体nsp2nb串联后再与E3泛素连接酶接头蛋白SPOP中BTB结构域融合后得到。本发明利用筛选出的特异性结合PRRSV关键复制酶Nsp2，Nsp9蛋白的纳米抗体，并用纳米抗体替代E3泛素连接酶复合体(SPOP)底物识别结构域，构建靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体。本发明的提出为PRRS的治疗以及抗PRRS育种提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113801854B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202110995235.9
申请日：2021-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(European type Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,EU‑type PRRSV)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，还公开了由该杂交瘤细胞系分泌的抗欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的特异性单克隆抗体及竞争ELISA方法的建立。该杂交瘤细胞系命名为EU1，其微生物保藏号是：CGMCC NO.23019。本发明的杂交瘤细胞系能够稳定分泌特异性识别EU‑type PRRSV的单克隆抗体，可用于特异性针对EU‑type PRRSV的竞争ELISA方法的建立。本发明的EU1杂交瘤细胞系及其分泌的单克隆抗体可以用于制备竞争法抗体诊断试剂盒，基于EU1建立的抗体鉴别诊断试剂盒可以区分EU‑type PRRSV和其它类型PRRSV的感染。
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公开(公告)号：CN113321712B
公开(公告)日：2023-02-24
申请号：CN202110819705.6
申请日：2021-07-20
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K14/08 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 一组猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗原多肽及其应用，它涉及生物检测技术领域，本发明要解决在血清学上无法有效区分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程标记弱毒疫苗的问题，本发明的抗原肽是由序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2中的一种或者两种所示的多肽组成的组合物。它用于制备ELISA诊断试剂盒。本发明筛选可用于鉴别诊断的蛋白多肽，并建立相应的间接ELISA检测方法。为今后PRRS基因工程标记弱毒疫苗株提供候选标签蛋白，为PRRS疫苗株和野毒株的鉴别诊断提供技术支持。本发明应用于猪用疫苗及诊断领域。
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公开(公告)号：CN114717204A
公开(公告)日：2022-07-08
申请号：CN202210220569.3
申请日：2022-03-08
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N15/38 , C12N15/869 , A61K39/245 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一种复制缺陷型伪狂犬病病毒构建方法和应用。所述的复制缺陷型伪狂犬病病毒是在包含PRV全基因组的BAC感染性克隆的基础上，将其中的gB基因编码序列中的第151或196位精氨酸突变为终止密码子TGA后得到的。本发明用tRNA反密码子编辑(Anticodon‑engineeredtransferRNAs，ACE‑tRNAs)技术实现DNA病毒提前终止密码子(Prematurestopcodon，PTC)的高效通读并应用于动物病毒疫苗的研究。证明了基于ACE‑tRNAs技术研究的复制缺陷病毒作为疫苗应用的可行性。本发明的提出为伪狂犬病病毒的防治提供了一种新的技术手段，同时也为解决一直困扰人们的疫苗安全性和有效性的问题提供了一种新的思路，代表了一种有前途的疫苗研究工具，为其它疫苗研究困难的病毒新型疫苗开发打开一扇新的大门。
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公开(公告)号：CN111849924B
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202010580477.7
申请日：2020-06-23
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了类NADC30猪蓝耳病强毒株、弱毒株及其应用。本发明的一种类NADC30猪蓝耳病强毒株，命名为类NADC30猪蓝耳病病毒SD株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.19691。通过对该SD株进行致弱培养，本发明还获得了一株类NADC30猪蓝耳病弱毒株，命名为类NADC30猪蓝耳病病毒SD‑R株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.19692。实验证明，本发明的SD株具有毒力强、对仔猪致病力稳定的特征，可用于检验预防或治疗类NADC30猪繁殖与呼吸综合征；本发明的弱毒疫苗株SD‑R株具有安全性高、保护效果好的特征，可用于预防类NADC30猪繁殖与呼吸综合征。因此，本发明的SD株及其弱毒疫苗SD‑R株可用于制备成防治类NADC30猪繁殖与呼吸综合征的单苗或联苗(活或灭活疫苗)等，也可以制备成诊断类NADC30猪繁殖与呼吸综合征的诊断试剂。
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公开(公告)号：CN112125960B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202010878710.X
申请日：2020-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/20 , C07K1/14 , C07K1/30 , C07K1/18 , C12N15/70 , C12N15/34 , C12P21/02 , A61K39/295 , A61K39/12 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种适用于大规模工厂化生产操作的去除内毒素的通用方法。本发明将液相分离去除内毒素法和疏水层析去除内毒素法进行了结合和改进，保留了液相分离法高效去除内毒素的优点和疏水层析法适合大规模工厂化操作的优点，去掉了液相分离法中繁琐的离心和萃取以及疏水层析法中的高盐步骤。本发明可用于重组蛋白中内毒素的去除，也可用于制药业的药液中内毒素的去除，经过本发明的方法处理后，最终蛋白溶液中内毒素的含量为不超过10EU/mL或10EU/mg(目的蛋白)，通过本方法，能够以较低的成本将兽用疫苗中内毒素的含量控制到和人用疫苗相近的标准。本发明的一种去除内毒素的方法，具有高效、高回收率、低成本、易于大规模工厂化生产操作的特点。
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