一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH-VLλ11及其制备方法

    公开(公告)号:CN112592401A

    公开(公告)日:2021-04-02

    申请号:CN202011452599.4

    申请日:2020-12-12

    Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞,提取分离淋巴细胞的总mRNA,通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段,以cDNA为模板,在相应的带有Linker接头的引物的作用下,通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列,将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11,对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料,为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。

    用于猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒双重一步直扩实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN111440900A

    公开(公告)日:2020-07-24

    申请号:CN202010357491.0

    申请日:2020-04-29

    Abstract: 本发明公开了一种用于猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒双重一步直扩实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒包含核酸提取液、2×Direct qRT-PCR Mix、酶混合液、阴性对照,阳性对照以及引物和探针的混合物,其中所述的引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示,所述的探针的核苷酸序列为SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示,SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示探针的5’端分别标记荧光报告基团HEX和FAM;所述探针的3’端标记小沟结合物(MGB)和荧光淬灭基团(BHQ-1)。本发明可实现在一个反应中同时对猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒进行快速鉴别检测,具有特异性高,稳定性好,操作简便的优点。不仅适用于科研单位定量分析,而且适合于各级防控单位,基层兽医站,大中型养殖场等的病原检测分析,具有较好的应用前景。

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