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公开(公告)号:CN101575650B
公开(公告)日:2012-03-28
申请号:CN200910087099.2
申请日:2009-06-24
Applicant: 中国兽医药品监察所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/68 , G01N21/78 , G01N27/447 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)序列,设计了PRSSV RT-LAMP反应系统所需引物;采用本发明人设计并配制的病毒RNA提取试剂(LBB II-RNA)提取PRSSV病毒RNA,使用本发明建立的PRSSV RT-LAMP反应体系进行检测,反应结束后加入显色剂判定结果,结果显示在63℃45min,PRSSV病毒RNA获得了高效的特异性扩增;再利用SpuI酶切进行猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株)的快速检测。相较现有技术,本发明具有检测速度快,灵敏度强并能区分检测美洲型经典毒株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株),而且反应成本低、操作便捷,适合多层次检测需求。
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公开(公告)号:CN101586169B
公开(公告)日:2012-02-08
申请号:CN200910087562.3
申请日:2009-06-30
Applicant: 中国兽医药品监察所
Abstract: 本发明涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的PCV2基因序列,在其序列保守区域设计了PCV2 LAMP引物4条;以PCV2 HuB株、PCV2LN株病毒DNA为模板,使用本研究建立的PCV2 LAMP反应体系进行LAMP反应。利用LA-320LAMP Tubidimeter仪分析反应过程和反应结束后加入SYBRgreenI显色剂判定结果,结果显示在LA-320 LAMP Tubidimeter仪中63℃30min,PCV2DNA获得了高效的特异性扩增,加入SYBRgreenI显色判定与仪器分析显示结果一致。通过敏感性试验证明:本方法可对50ngPCV2的DNA模板进行10-7稀释后仍可高效扩增,显示出本方法高度的敏感性;通过特异性试验和临床样品的PCV2核酸的LAMP检测,结果显示本方法特异、简单、迅速,适合用于PCV2的检测工作。
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公开(公告)号:CN102221618A
公开(公告)日:2011-10-19
申请号:CN201110170442.7
申请日:2011-06-23
Applicant: 中国兽医药品监察所
IPC: G01N33/68 , C12N15/85 , C12N7/01 , A61K39/187 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及一种猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建及疫苗的制备方法。包括如下步骤:(1)猪瘟兔化弱毒株(C株或Chinese株)全长感染性克隆的构建方法;(2)标记蛋白基因的引入方法;(3)猪瘟兔化弱毒标记疫苗病毒的拯救;(4)病毒的繁殖;(5)病毒液检验;(6)疫苗制造;(7)疫苗成品检验,包括安全检验和效力检验。本发明构建的猪瘟兔化弱毒株标记疫苗,不仅保持了猪瘟兔化弱毒株安全性好,免疫原性优良等特点,而且该毒株稳定性好,细胞生产病毒含量高,能用于工业化大生产,免疫猪体后可产生标记蛋白特异性抗体,以此来区分免疫和自然感染,对防控净化猪瘟及紧急免疫都具有重大意义。
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公开(公告)号:CN101575650A
公开(公告)日:2009-11-11
申请号:CN200910087099.2
申请日:2009-06-24
Applicant: 中国兽医药品监察所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/68 , G01N21/78 , G01N27/447 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)序列,设计了PRSSV RT-LAMP反应系统所需引物;采用本发明人设计并配制的病毒RNA提取试剂(LBB II-RNA)提取PRSSV病毒RNA,使用本发明建立的PRSSV RT-LAMP反应体系进行检测,反应结束后加入显色剂判定结果,结果显示在63℃ 45min,PRSSV病毒RNA获得了高效的特异性扩增;再利用SpuI酶切进行猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株)的快速检测。相较现有技术,本发明具有检测速度快,灵敏度强并能区分检测美洲型经典毒株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株),而且反应成本低、操作便捷,适合多层次检测需求。
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公开(公告)号:CN119751657A
公开(公告)日:2025-04-04
申请号:CN202510108036.X
申请日:2025-01-23
Applicant: 中国兽医药品监察所
IPC: C07K16/08 , C12N15/13 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及兽用生物医学技术领域,特别是涉及一种抗PCV2单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株及其分泌的单抗5A8和单抗4C2,能够特异性识别PCV2不同基因型毒株,组合使用,能够将PCV2d基因型毒株与PCV2a、PCV2b基因型毒株进行鉴别。单抗的特异性实验表明,本发明提供的单克隆抗体对其他常见猪源病毒,如猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、轮状病毒等无反应性,具有良好的敏感性和特异性。
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公开(公告)号:CN118773187A
公开(公告)日:2024-10-15
申请号:CN202411077473.1
申请日:2024-08-07
Applicant: 中国兽医药品监察所
Abstract: 本发明属于单克隆抗体制备技术领域,具体涉及一种通用型全猪源单克隆抗体的制备方法。本发明基于单个B细胞抗体制备技术,通过流式细胞分选技术从免疫猪或临床康复猪外周血中分离出抗原特异性单个B淋巴细胞;根据数据库中猪源免疫球蛋白IgG抗体基因序列,分别设计引物特异性扩增猪源单个B细胞中抗体重链和轻链完整编码基因并加入His标签,以pCDNA3.1‑Leader为真核表达载体,构建抗体轻重链完整编码基因重组载体,通过哺乳动物细胞表达天然全猪源单克隆抗体。本发明首次建立一种通用型全猪源单克隆抗体制备方法,可用于不同病原的猪源单克隆抗体库的制备及筛选,相较于其他抗体制备方法具有高通量、全猪源、多样性好、抗体完整且天然配对等优势,为快速制备和筛选猪源单克隆抗体提供技术支撑,具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号:CN118755879A
公开(公告)日:2024-10-11
申请号:CN202410737602.9
申请日:2024-06-07
Applicant: 中国兽医药品监察所
Abstract: 本申请涉及兽医诊断技术领域,具体涉及一种探针组合物、一种引物组合物以及由上述探针组合物及引物组合物构成的一种三重荧光PCR鉴别诊断非洲猪瘟不同毒株三种基因的试剂盒及相关方法,所述试剂盒包括B646L基因、CD2v基因、I177L基因特异性引物探针,本申请针对B646L基因、CD2v基因、I177L基因分别设计了荧光PCR引物和探针,建立了三重荧光PCR检测方法,可以快速鉴别非洲猪瘟病毒毒株和基因缺失毒株,同时与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、健康的全血、口咽拭子、鼻拭子、肛拭子、环境拭子、猪组织等均无交叉反应,特异性好。
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公开(公告)号:CN102304496B
公开(公告)日:2012-12-26
申请号:CN201010105953.6
申请日:2010-02-05
Applicant: 中国兽医药品监察所
Abstract: 本发明涉及一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育。本发明是将由我国分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征野毒株经过全面鉴定后,再将其在Marc145细胞中连续传代后使其毒力减弱获得弱毒疫苗株GDr株病毒(其保藏编号为CGMCC No.3599),回传至猪毒力不返强,遗传性能稳定;本毒株可在Marc145细胞上高效增殖;该毒株毒力低该毒株具有良好的免疫原性,最小免疫剂量可达104TCID50,接种猪后的免疫持续期可达4个月。
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公开(公告)号:CN101603035B
公开(公告)日:2011-06-08
申请号:CN200910062139.8
申请日:2009-05-18
Applicant: 中国兽医药品监察所 , 美国PROTATEK国际股份有限公司 , 武汉中博生物股份有限公司
Abstract: 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合重组疫苗株及其生产活疫苗的方法,利用反向遗传操作和基因重组技术将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典毒PTK株的GP2基因的后半部分及GP3~GP5基因、M蛋白基因、N蛋白基因及其间隔序列和3’非编码区的所有核苷酸序列全部删除后,替换成中国高致病猪蓝耳病变异毒株的对应基因,重组成一个同时含有猪繁殖与呼吸综合征经典株和变异株基因的嵌合重组疫苗株(PC株),并利用嵌合重组疫苗PC株生产活疫苗具有毒力低,回传猪5代毒力不返强,遗传性能稳定;具有良好的免疫原性,可同时保护猪蓝耳病经典毒株和高致病性变异毒株的感染。
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公开(公告)号:CN101586169A
公开(公告)日:2009-11-25
申请号:CN200910087562.3
申请日:2009-06-30
Applicant: 中国兽医药品监察所
Abstract: 本发明涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的PCV2基因序列,在其序列保守区域设计了PCV2 LAMP引物4条;以PCV2 HuB株、PCV2LN株病毒DNA为模板,使用本研究建立的PCV2 LAMP反应体系进行LAMP反应。利用LA-320LAMP Tubidimeter仪分析反应过程和反应结束后加入SYBRgreenI显色剂判定结果,结果显示在LA-320LAMP Tubidimeter仪中63℃ 30min,PCV2DNA获得了高效的特异性扩增,加入SYBRgreenI显色判定与仪器分析显示结果一致。通过敏感性试验证明:本方法可对50ngPCV2的DNA模板进行10 -7 稀释后仍可高效扩增,显示出本方法高度的敏感性;通过特异性试验和临床样品的PCV2核酸的LAMP检测,结果显示本方法特异、简单、迅速,适合用于PCV2的检测工作。
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