猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法

    公开(公告)号:CN101575650B

    公开(公告)日:2012-03-28

    申请号:CN200910087099.2

    申请日:2009-06-24

    Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)序列,设计了PRSSV RT-LAMP反应系统所需引物;采用本发明人设计并配制的病毒RNA提取试剂(LBB II-RNA)提取PRSSV病毒RNA,使用本发明建立的PRSSV RT-LAMP反应体系进行检测,反应结束后加入显色剂判定结果,结果显示在63℃45min,PRSSV病毒RNA获得了高效的特异性扩增;再利用SpuI酶切进行猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株)的快速检测。相较现有技术,本发明具有检测速度快,灵敏度强并能区分检测美洲型经典毒株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株),而且反应成本低、操作便捷,适合多层次检测需求。

    猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒及其检测方法

    公开(公告)号:CN101586169B

    公开(公告)日:2012-02-08

    申请号:CN200910087562.3

    申请日:2009-06-30

    Abstract: 本发明涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的PCV2基因序列,在其序列保守区域设计了PCV2 LAMP引物4条;以PCV2 HuB株、PCV2LN株病毒DNA为模板,使用本研究建立的PCV2 LAMP反应体系进行LAMP反应。利用LA-320LAMP Tubidimeter仪分析反应过程和反应结束后加入SYBRgreenI显色剂判定结果,结果显示在LA-320 LAMP Tubidimeter仪中63℃30min,PCV2DNA获得了高效的特异性扩增,加入SYBRgreenI显色判定与仪器分析显示结果一致。通过敏感性试验证明:本方法可对50ngPCV2的DNA模板进行10-7稀释后仍可高效扩增,显示出本方法高度的敏感性;通过特异性试验和临床样品的PCV2核酸的LAMP检测,结果显示本方法特异、简单、迅速,适合用于PCV2的检测工作。

    猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建及疫苗的制备方法

    公开(公告)号:CN102221618A

    公开(公告)日:2011-10-19

    申请号:CN201110170442.7

    申请日:2011-06-23

    Abstract: 本发明涉及一种猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建及疫苗的制备方法。包括如下步骤:(1)猪瘟兔化弱毒株(C株或Chinese株)全长感染性克隆的构建方法;(2)标记蛋白基因的引入方法;(3)猪瘟兔化弱毒标记疫苗病毒的拯救;(4)病毒的繁殖;(5)病毒液检验;(6)疫苗制造;(7)疫苗成品检验,包括安全检验和效力检验。本发明构建的猪瘟兔化弱毒株标记疫苗,不仅保持了猪瘟兔化弱毒株安全性好,免疫原性优良等特点,而且该毒株稳定性好,细胞生产病毒含量高,能用于工业化大生产,免疫猪体后可产生标记蛋白特异性抗体,以此来区分免疫和自然感染,对防控净化猪瘟及紧急免疫都具有重大意义。

    猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法

    公开(公告)号:CN101575650A

    公开(公告)日:2009-11-11

    申请号:CN200910087099.2

    申请日:2009-06-24

    Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSSV)序列,设计了PRSSV RT-LAMP反应系统所需引物;采用本发明人设计并配制的病毒RNA提取试剂(LBB II-RNA)提取PRSSV病毒RNA,使用本发明建立的PRSSV RT-LAMP反应体系进行检测,反应结束后加入显色剂判定结果,结果显示在63℃ 45min,PRSSV病毒RNA获得了高效的特异性扩增;再利用SpuI酶切进行猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株)的快速检测。相较现有技术,本发明具有检测速度快,灵敏度强并能区分检测美洲型经典毒株和NSP2变异株(高致病性蓝耳病毒株),而且反应成本低、操作便捷,适合多层次检测需求。

    一种通用型全猪源单克隆抗体的制备方法

    公开(公告)号:CN118773187A

    公开(公告)日:2024-10-15

    申请号:CN202411077473.1

    申请日:2024-08-07

    Abstract: 本发明属于单克隆抗体制备技术领域,具体涉及一种通用型全猪源单克隆抗体的制备方法。本发明基于单个B细胞抗体制备技术,通过流式细胞分选技术从免疫猪或临床康复猪外周血中分离出抗原特异性单个B淋巴细胞;根据数据库中猪源免疫球蛋白IgG抗体基因序列,分别设计引物特异性扩增猪源单个B细胞中抗体重链和轻链完整编码基因并加入His标签,以pCDNA3.1‑Leader为真核表达载体,构建抗体轻重链完整编码基因重组载体,通过哺乳动物细胞表达天然全猪源单克隆抗体。本发明首次建立一种通用型全猪源单克隆抗体制备方法,可用于不同病原的猪源单克隆抗体库的制备及筛选,相较于其他抗体制备方法具有高通量、全猪源、多样性好、抗体完整且天然配对等优势,为快速制备和筛选猪源单克隆抗体提供技术支撑,具有广泛的应用前景。

    猪圆环病毒2型LAMP检测试剂盒及其检测方法

    公开(公告)号:CN101586169A

    公开(公告)日:2009-11-25

    申请号:CN200910087562.3

    申请日:2009-06-30

    Abstract: 本发明涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)LAMP检测试剂盒及其检测方法。根据GenBank公布的PCV2基因序列,在其序列保守区域设计了PCV2 LAMP引物4条;以PCV2 HuB株、PCV2LN株病毒DNA为模板,使用本研究建立的PCV2 LAMP反应体系进行LAMP反应。利用LA-320LAMP Tubidimeter仪分析反应过程和反应结束后加入SYBRgreenI显色剂判定结果,结果显示在LA-320LAMP Tubidimeter仪中63℃ 30min,PCV2DNA获得了高效的特异性扩增,加入SYBRgreenI显色判定与仪器分析显示结果一致。通过敏感性试验证明:本方法可对50ngPCV2的DNA模板进行10 -7 稀释后仍可高效扩增,显示出本方法高度的敏感性;通过特异性试验和临床样品的PCV2核酸的LAMP检测,结果显示本方法特异、简单、迅速,适合用于PCV2的检测工作。

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