公开(公告)号：CN109880851A

公开(公告)日：2019-06-14

申请号：CN201910244538.X

申请日：2019-03-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  闫娜娜 ,  孙永森 ,  徐坤 ,  房圆圆 ,  邓竞荣 ,  穆璐

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种用于富集CRISPR/Cas9介导的同源重组修复细胞的筛选报告载体及筛选方法。筛选报告载体包括通用sgRNA表达盒、Cas9表达盒、抗性基因表达盒以及抗性基因同源重组修复模板，筛选报告载体自身可以通过抗性基因序列同源重组修复而使细胞产生抗性。所述的筛选报告载体与用于细胞基因组HDR编辑的打靶载体及供体载体组成共转染系统，可应用于高效富集发生点编辑、片段插入和片段删除的HDR阳性细胞克隆，并且可广泛应用于哺乳动物的多种细胞，显著提高了HDR编辑细胞的筛选效率，同时无需对细胞基因组的无关位置再引入双链断裂与DNA整合，为推动精准基因编辑的研究和应用提供有效途径。