公开(公告)号：CN106636212A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201611005082.4

申请日：2016-11-15

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  王小龙 ,  牛怡源 ,  蔡蓓 ,  周世卫

IPC: C12N15/877 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/8772 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/102 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/47 ,  C12N2800/80

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统生产GDF9基因编辑山羊的方法。本发明首先获得针对山羊GDF9第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列；其次设计靶向DNA序列的sgRNA，构建针对GDF9第二外显子且含T7启动子的sgRNA体外转录载体；最后设计合成ssODN，利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA、sgRNA，通过受精卵注射体外转录载体获得的Cas9 mRNA、sgRNA和合成的ssODN，即可用于生产GDF9基因PV397I点突变的基因编辑山羊。