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公开(公告)号：CN110004134B
公开(公告)日：2020-12-25
申请号：CN201910425967.7
申请日：2019-05-21
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明涉及一种褐藻胶裂解酶突变体及应用，属于酶工程和基因工程领域，该突变体在序列SEQ ID NO.3基础上将第226位E突变为K，经过表达，突变体酶活提高1.11倍，粗酶液经过纯化后比活力较截短酶AlgL‑T157N提高1.03倍；突变体最适温度55℃，在pH 6.0‑8.0内保温1 h酶活力基本不变，具有较强pH稳定性；突变体对褐藻酸钠、Poly M和Poly G的催化效率Kcat/Km分别比AlgL‑T157N提高10.22、8.59、2.97倍。本发明采用结构序列分析和软件辅助筛选相结合的方法，确定突变位点，通过PCR定点突变得到催化活性提高的突变体，为其进一步的工业化应用奠定基础。
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公开(公告)号：CN110904188A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911342288.X
申请日：2019-12-23
Applicant: 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
Abstract: 本发明公开了一种L-苏氨酸转醛酶突变体的高通量快速筛选方法，属于生物化学和酶工程领域。本发明取乙醛及乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均反应速率VOD340nm，以乙醛浓度为自变量x，VOD340nm为因变量y，得到回归方程y＝ax，以及乙醛标准曲线。转醛反应液、L-苏氨酸转醛酶突变体全细胞反应液，充分混匀反应结束后，离心除去细胞沉淀，取上清液和乙醇脱氢酶反应液，随即置于酶标仪中检测OD340nm随时间的变化情况，计算OD340nm下降的平均速率VOD340nm；通过VOD340nm计算得到反应液中乙醛的浓度，以乙醛浓度的高低来筛选L-苏氨酸转醛酶突变体。本发明不受反应液中的杂质干扰，灵敏度和准确性高，重复性好，操作简便，便于推广应用。
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公开(公告)号：CN109207459A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811408686.2
申请日：2018-11-23
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明提供一种定点突变改造热稳定性提高的琼胶酶突变体，属于基因工程与酶工程领域。本发明突变体是在SEQ ID NO.2所示的β-琼胶酶rAgaZC-1的氨基酸基础上，将第622位天冬氨酸突变为甘氨酸（D622G），突变体D622G核苷酸序列及对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。D622G的催化效率较于rAgaZC-1有17.6%的提高。热失活动力学和水解动力学分析表明，D622G的热稳定性明显提高，T5010提高1.5℃，41℃下的半衰期t1/2延长3倍，且在43℃下可以积累更多的琼胶寡糖，提高了琼胶酶在降解琼脂糖制备琼胶寡糖上的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118530954A
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410645568.2
申请日：2024-05-23
Applicant: 福州大学
IPC: C12N9/02 , C12N9/04 , C12N15/53 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P17/16 , C12P41/00 , C07D401/12 , A61K31/4439 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种多环酮单加氧酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列通过突变获得，并公开基于该突变体的不对称生物催化合成拉唑类药物的方法。基于本发明开发的酶催化剂可以以拉唑硫醚为原料，采用全细胞或酶蛋白催化的方法，在温和的条件下不对称催化合成(R)‑雷贝拉唑、兰索拉唑等拉唑类化合物，无需化学催化剂，环境友好，是一种绿色生物催化合成途径。
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公开(公告)号：CN113528475B
公开(公告)日：2023-04-21
申请号：CN202110831411.5
申请日：2021-07-22
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种羰基还原酶突变体及其在制备甾体激素‑‑睾酮中的应用。将羰基还原酶突变体PmCRm与甲酸脱氢酶BstFDH_m在大肠埃希氏菌中共表达，并以该共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂催化雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮合成睾酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在10 h以内完全转化28.8 g/L雄甾‑4‑烯‑3，17‑二酮生成目标产物睾酮，且无副产物产生，其底物投料量、转化率和时空转化率皆为国内生物法制备睾酮的最高水平，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是睾酮绿色合成的高效催化剂。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115786292A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211028698.9
申请日：2022-08-25
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种3α‑羟基甾体脱氢酶SfSDR及其在制备去氢表雄酮中的应用。本发明将3α‑羟基甾体脱氢酶SfSDR与葡萄糖脱氢酶BtGDH在大肠埃希氏菌中共表达，并以共表达工程菌的静息细胞作为生物催化剂协同酯酶Z03共同催化3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮合成去氢表雄酮。该生物催化剂具有较高的催化活性、区域选择性和立体选择性，可以在6 h以内完全转化32.8 g/L的3‑乙酰氧基‑△3,5‑雄甾二烯‑17‑酮生成目标产物去氢表雄酮，无需添加有机溶剂且无副产物产生，经过分离纯化，产物回收率高达95%以上，说明该生物催化剂是去氢表雄酮绿色合成的高效催化剂。
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公开(公告)号：CN109207459B
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN201811408686.2
申请日：2018-11-23
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明提供一种定点突变改造热稳定性提高的琼胶酶突变体，属于基因工程与酶工程领域。本发明突变体是在SEQ ID NO.2所示的β‑琼胶酶rAgaZC‑1的氨基酸基础上，将第602位天冬氨酸突变为甘氨酸（D602G），突变体D602G核苷酸序列及对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。D602G的催化效率较于rAgaZC‑1有17.6%的提高。热失活动力学和水解动力学分析表明，D602G的热稳定性明显提高，T5010提高1.5℃，41℃下的半衰期t1/2延长3倍，且在43℃下可以积累更多的琼胶寡糖，提高了琼胶酶在降解琼脂糖制备琼胶寡糖上的应用潜力。
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公开(公告)号：CN113430216A
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202110845214.9
申请日：2021-07-26
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明提供一种苯丙酮单加氧酶，其氨基酸序列由SEQ ID NO:2所示氨基酸序列通过突变获得，并公开基于该苯丙酮单加氧酶的不对称生物催化合成亚砜类药物的技术方法。本发明通过基因挖掘筛选获得来源于Limnobacter sp.的苯丙酮单加氧酶基因，采用基因工程技术构建重组大肠杆菌表达菌株，通过分子改造技术实现酶活力和立体选择性的提高。同时构建了单加氧酶突变体与不同脱氢酶的共表达菌株。以奥美拉唑硫醚为原料，采用全细胞或酶蛋白催化的方法，不对称催化合成光学纯埃索美拉唑。本发明可以在温和的条件下通过一步反应获得目标产物，没有副产物奥美拉唑砜，同时环境友好，是一种绿色生物催化合成途径。
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公开(公告)号：CN110951799B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN201911340672.6
申请日：2019-12-23
Applicant: 福州大学 , 福建昌生生物科技发展有限公司
Abstract: 本发明提供了“一菌多酶”全细胞不对称合成(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的方法，属于生物催化和酶工程领域。通过在大肠杆菌BL21（DE3）工程菌中同时表达L‑苏氨酸转醛酶（PsLTTA）、乙醇脱氢酶（ApADH）和甲酸脱氢酶（CbFDH），实现(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸的不对称高效生物合成。本发明在常温常压下通过一步反应便可获得β‑氨基醇类抗生素的关键手性砌块(2S，3R)‑对甲砜基苯丝氨酸，同时解除了副产物乙醛对PsLTTA的抑制作用，为一种高效绿色生物合成途径。
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公开(公告)号：CN108913677B
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201810813706.8
申请日：2018-07-23
Applicant: 福州大学
Abstract: 本发明提供一种定点突变改造的碱性普鲁兰酶及其应用，本发明定点突变改造的碱性普鲁兰酶是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸基础上，将第744位苯丙氨酸突变为丙氨酸。对突变体F744A转化大肠杆菌进行异源表达，发现突变体酶活提高了32.18%；热稳定性也得到了提高，T5030为55.84℃，比原始酶PulSL3△C提高了2.94℃；突变体F744A的pH稳定范围更宽，在pH 5.0~10.0范围内保温1 h仍可保留90%以上的酶活力。作为添加剂应用于洗涤剂行业，可以明显提高洗涤效果。
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