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公开(公告)号：CN118240823A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410322073.6
申请日：2024-03-20
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 , 湖南楚沩香农牧股份有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种用于敲除猪CD163、MSTN基因的sgRNA组合物、载体及其应用，属于生物医学技术领域。本发明通过分别对猪CD163、MSTN基因设计基因编辑双靶位点，该靶位点均能被Cas9核酸内切酶特异性识别，从而介导双链断裂，在自我修复系统的作用下通过非同源末端连接的方式使基因发生突变，然后设计sgRNA组合物，并且以tRNA‑sgRNA‑sgRNA scaffold为最小重复单元，利用PTG/Cas9策略构建Cas9‑CD163‑MSTN多顺反子载体，从而实现了高效、精准地敲除靶基因，因此，在猪种质改良中具有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117210506A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311173216.3
申请日：2023-09-12
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/87 , C12N15/113 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种小干扰RNA高效转染卵母细胞的方法，具体为：将卵母细胞置于纳米电穿孔缓冲液中进行电击，其中所述纳米电穿孔缓冲液为包括siRNA、纳米多肽的卵母细胞培养液。本发明方法保留了透明带，对卵母细胞后续发育潜能无影响，通过电穿孔和纳米多肽的协同作用，实现了较高的干扰效率，操作流程简单且时间短成本低。本发明建立的卵母细胞siRNA转染方法，极大地提高了生殖生物学和动物繁殖学相关领域研究人员的工作效率，减少对仪器和人员的依赖，减低成本，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113827368A
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN202111241903.5
申请日：2021-10-25
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 , 武汉纽利特生物技术有限公司
IPC: A61D19/04
Abstract: 本发明公开了一种活体采集猪体内1、2、4、8细胞期胚胎的收集方法，该方法主要包括以下流程：母猪发情鉴定、人工输精、手术冲胚、挑胚及体外胚胎培养等步骤。本发明方法提出了一种活体收集猪体内1‑细胞、2‑细胞、4‑细胞、8‑细胞期胚胎的收集方法及专用设备，该方法能从供体母猪输卵管内获得不同发育阶段的胚胎，供胚胎发育、基因原核注射、嵌合体动物制备等研究，有效解决了体外授精胚胎质量差、移植受孕率低的问题，从而提高转基因或基因编辑猪的生产效率。
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公开(公告)号：CN118652836B
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202410820667.X
申请日：2024-06-24
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了三丁酸甘油酯作为胚胎体外发育培养液添加剂的用途，属于动物生殖生物学技术领域。本发明首次将三丁酸甘油酯作为添加剂应用于鼠胚胎体外发育培养液，该三丁酸甘油酯能显著提高囊胚率，并且减少胚胎内ROS含量、改善胚胎内线粒体膜电位、提高胚胎内ATP水平及抗氧化基因的表达，改善胚胎内DNA甲基化和组蛋白修饰水平，促进胚胎体外发育；并且三丁酸甘油酯作为天然抗氧化剂和表观药物，安全无毒副作用、价格便宜易获取，在整个发育培养过程中无需更换培养液，操作简单；该三丁酸甘油酯为人类辅助生殖技术的胚胎高效发育、哺乳动物受精胚胎、孤雌胚胎和体细胞克隆胚胎等体外胚胎工程技术均提供了有力支持，应用前景良好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116287004A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310436265.5
申请日：2023-04-21
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种成纤维细胞基因转染方法，所述方法包括：获得细胞浓度为1～2个/uL的成纤维细胞悬液，将所述成纤维细胞悬液于细胞培养皿中制备细胞悬液微滴，每个所述细胞悬液微滴由体积为10±0.5uL的所述成纤维细胞悬液形成；将所述含有细胞悬液微滴的细胞培养皿于套皿微环境中孵育，细胞贴壁后加入细胞培养基培养；获得浓度为150～200ng/uL的含有线性化目的基因的质粒溶液；将所述质粒溶液吸入注射针中，调整所述注射针与水平面所成夹角的角度为30～60°，依次向每个所述细胞注射；注射后进行单细胞培养，获得稳定转染的转基因细胞克隆。获得不带筛选标记细胞系的目的，同时能够实现高效率的稳转。
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公开(公告)号：CN115873854A
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202210835106.8
申请日：2022-07-15
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种靶向敲除猪MSTN的sgRNA及其单碱基编辑系统与应用，属于基因敲除技术领域，所述sgRNA的核苷酸序列为5′‑GGCACTGGTATTTGGCAGAGC‑3′，所述猪MSTN的sgRNA以第2外显子为打靶区域，能够精准、快速靶向猪MSTN基因，从而能够保证后续猪MSTN基因发生定点突变，达到敲除猪MSTN基因的目的。本发明利用单碱基编辑器在猪MSTN基因第2外显子处成功引入终止密码子，实现定点编辑，为后期生产瘦肉率高的碱基突变猪奠定基础。本发明成功获得了猪MSTN敲除的单克隆细胞，为以后单碱基编辑在大型动物育种上提供了方向，得到的基因缺失单克隆细胞株为动物模型的建立提供了优秀的实验素材，对单碱基编辑猪的培育具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114107180A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111225743.5
申请日：2021-10-21
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了无透明带体细胞克隆1‑细胞期胚胎聚合及体外培养的方法。采用浓度为0.3％的链霉蛋白酶溶液去除重构胚和去核卵母细胞的透明带，两两一组放入含20％牛血清的洗卵液微滴中，用矿物油覆盖约30min，将1‑细胞期的克隆胚和去核卵母细胞，用自制玻璃吸管轻轻转移至电极宽度为1mm的融合槽中1对1排列，再用自制的拨卵针轻轻将2枚卵拨贴在一起，使2枚卵胞质接触切面与电场方向垂直或近似垂直，也就是组成的“8”字卵正直于两侧电极之间，然后进行融合/聚合，将相互融合的胚胎转入自制的“U型”微滴培养体系中进行培养，体细胞克隆胚胎的卵裂率达到95.7％，囊胚发育率达到69.8％，极大改善了体外克隆重构胚的发育潜力。
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公开(公告)号：CN119286862A
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202411502198.3
申请日：2024-10-25
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12Q1/6888 , C12N15/85 , C12N15/64 , C12N5/10 , C12P7/56
Abstract: 本发明公开了一种猪环状RNA、猪circLDHC、过表达载体及其构建方法和应用，涉及家畜分子生物学技术领域。所述猪环状RNA由LDHC基因第3‑6外显子环化形成，猪环状RNA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述猪circLDHC由猪环状RNA经逆转录所得。本发明针对circLDHC设计特异性扩增引物，经PCR扩增、测序及RNase R酶消化验证所述的circLDHC的真实存在。荧光定量PCR分析发现circLDHC在猪性成熟睾丸组织中高表达，其表达水平与睾丸的成熟相关，同时在75日龄梅山公猪睾丸中表达量极显著高于同日龄杜洛克公猪(p
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公开(公告)号：CN118360238A
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202410467486.3
申请日：2024-04-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/077 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种单克隆细胞的制备方法及应用，属于细胞生物学技术领域。本发明提供了一种单克隆细胞的制备方法，利用原代成纤维细胞进行培养，选取对数生长期的细胞进行转染，并对转染后的细胞进行抗生素筛选，直到有细胞单克隆的出现，挑选单克隆细胞。利用本发明所述制备方法制备得到的单克隆细胞，效率高且挑选的单克隆较为单一，挑选时细胞始终处于液体中，细胞的成活率高。本发明得到的所述单克隆细胞可作为动物体细胞核移植的供体细胞，用于转基因克隆动物的制备。
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