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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104830748A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510295531.2
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种弱化hemB基因表达提高大肠杆菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pRSFDuet-1过量表达谷氨酰-tRNA还原酶，谷氨醛氨基转移酶和粪卟啉原III氧化酶以及使用载体pETDuet-1过量表达尿卟啉原III合酶的基础上，通过在基因组水平改造hemB基因的启动子进而调控其表达，考察其对ALA积累的影响。通过摇瓶发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2680mg/L。
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公开(公告)号：CN104593354A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510019222.2
申请日：2015-01-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种基于体外组合组装快速定向进化DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明将目标基因分成多个片段并进行体外扩增，通过在引物中引入兼并突变序列实现PCR扩增后获得含有不同突变区域的DNA片段，进而通过体外快速组装将所有片段组合为含有不同突变位点的完整基因。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，可用于调控序列如启动子、核糖体结合位点等基因的快速定向进化，特别适合于对酶基因的体外高效进化改造上，结合结构分析，确定突变区域，然后进行分段克隆，可在酶基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104561158A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510017646.5
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种添加Fe2+提高大肠杆菌工程菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明以已构建的合成5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)LADF-6为出发菌株，考察培养基中添加Fe2+对ALA合成的影响，通过发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2.25g/L。在此基础上，经过优化Fe2+的初始添加量并在3L发酵罐中放大培养，当添加10mg/L的Fe2+时，ALA产量为3.85g/L。
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公开(公告)号：CN104004701B
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201410274445.9
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建高产5-氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pACYCDuet-1过量表达5-氨基乙酰丙酸C5合成途径关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基础上，将来源于大肠杆菌血红素生物合成途径中的尿卟啉原III合酶(uroporphyrinogen III synthase,UROS,hemD编码)及粪卟啉原III氧化酶(coproporphyrinogen III oxidase,CPO,hemF编码)，使用pCDFDuet-1单独表达或共表达两个酶基因，构建重组菌株。通过发酵验证，单独表达hemD或hemF以及共表达hemD和hemF，ALA产量均明显提高。
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公开(公告)号：CN104017767B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410274656.2
申请日：2014-06-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用组合调控策略提高5-氨基乙酰丙酸产量的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明以EscherichiacoliBL21(DE3)作为出发菌株，使用表达载体pETDuet-1及pRSFDuet-1对ALA合成途径中起正调控作用的关键酶基因hemL，hemA，hemD，及hemF进行组合优化，构建重组菌株。通过发酵验证，采用高拷贝的质粒pRSFDuet-1表达hemA，hemL和hemF，中拷贝质粒pETDuet-1表达hemD，ALA产量产量最高，约3250mg/L。
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