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公开(公告)号：CN103602605B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201310568071.7
申请日：2013-11-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达米曲霉脯氨酰内肽酶的基因工程菌及其应用，是将基因S2导入毕氏酵母（Pichia pastoris）进行高效表达；所述基因S2编码一种新的脯氨酸特异性内切蛋白酶，核苷酸序列如以下1）或2）所示：1）其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；2）在1）限定的核苷酸序列基础上经碱基的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的脯氨酸特异性内切蛋白酶的核苷酸序列。所得重组酶具有脯氨酸特异性内切蛋白酶活性以及耐酸性环境等优点，对提高啤酒，葡萄酒，果汁饮品等非生物稳定性具有明显效果，具有重大应用潜力。
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公开(公告)号：CN104560933A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201410820656.8
申请日：2014-12-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/96
Abstract: 本发明公开了一种液态脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，属于酶制剂技术领域。本发明提供的脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，具有极其优异的储存稳定性，在4℃保存一年，其酶活保留率仍达90％以上，在37℃保存15天，其酶活保留率仍达50％以上，保存30天，其酶活保留率仍高达45％以上，解决了由于产品运送或储存时间较长导致产品应用性能迅速下降的问题。本发明提供的液体酶制剂复配方法简单，原料来源丰富并且成本低，特别适合在工业上推广。
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公开(公告)号：CN104328095A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410504995.5
申请日：2014-09-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种最适pH在酸性范围的磷脂酶A2及其应用，属于酶工程领域。本发明是将来源于S.violaceoruber的磷脂酶A2序列进行优化，将优化后的序列片段克隆到表达载体pPIC9K得到重组载体，再将重组载体线性化后转化到毕赤酵母中进行表达。本发明得到的磷脂酶A2的最适pH降低到6.0，适于植物油的脱胶，可以应用在酶制剂生产、油脂脱胶以及面制品加工方面等方面。
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公开(公告)号：CN102839164A
公开(公告)日：2012-12-26
申请号：CN201210327367.5
申请日：2012-09-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体及其构建方法和应用，属于酶工程技术领域，以华根霉（Rhizopus chinensis）CCTCC M 201021脂肪酶作为模板，在脂肪酶的盖子铰链区域引入二硫键而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体，相对于亲本脂肪酶，其Tm提高了7℃，具有广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102604908A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210083902.7
申请日：2009-11-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 高催化活力脂肪酶突变体，是由华根霉（Rhizopuschinensis）CCTCC M201021脂肪酶基因，其Genbank登录号EF405962，运用易错PCR方法，通过多轮重组和定点突变，经定向进化而获得的脂肪酶突变体，在突变体的氨基酸序列中，包含氨基酸突变Ser373Asn；以转换数Kcat表示，脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。
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公开(公告)号：CN101550605A
公开(公告)日：2009-10-07
申请号：CN200910027625.6
申请日：2009-05-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种基于体内同源重组构建酵母整合型基因突变文库的方法，属于蛋白质工程，分子生物学技术，基因工程领域。本发明方法为：构建目标基因的重组表达质粒；以此为模板，设计长引物片段，易错PCR扩增得到两端带有表达载体20～70bp同源序列的突变基因；分别对表达载体的与突变基因两端同源区域以及与基因组同源区域进行酶切线性化；将易错PCR扩增产物与线性化后的表达载体以一定的摩尔比混合电转化酵母，通过同源重组，外源突变目标基因整合入酵母基因组，获得基因突变文库。本方法效率高，操作方便，建库周期由1～2周缩短为3天，建库不需要任何亚克隆步骤，降低了突变基因容量与丰度的损失，具有通用性，可用于各种能在酵母中表达的目标基因。
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公开(公告)号：CN114410496B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202210140119.3
申请日：2022-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高毕赤酵母外源蛋白产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过过量表达热胁迫应答相关基因HSP78和SSA3，促进热胁迫应答机制的激活帮助胞内蛋白正确折叠，进而提升了毕赤酵母外源蛋白的产量。过量表达HSP78和SSA3后菌株的绿色荧光蛋白、脂肪酶和磷脂酶的表达量都有不同程度的提升，其中绿色荧光蛋白表达量最高提升50％，脂肪酶表达量最高提升57％，磷脂酶表达量最高提升81％，表明热激蛋白HSP78和SSA3在毕赤酵母表达外源蛋白、并提升外源蛋白的产量中具有更好的应用价值。
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公开(公告)号：CN116731882A
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202310702780.3
申请日：2023-06-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/15 , C12N15/80 , C12N15/31 , C12N15/55 , C12N15/56 , C12N9/20 , C12N9/42 , C07K14/37 , C12R1/885
Abstract: 本发明公开了一种提高里氏木霉中重组蛋白表达量的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用纤维素诱导强启动子Pcbh7IR实现重组CalB的表达，使CalB的表达水平较出发菌株C30/CalB提高2.3倍。在此基础上通过敲除vps10以减弱重组CalB在胞内向液泡的转运，并以中等强度启动子Pegl1适当回补纤维素酶Cbh1，进一步提升其重组CalB的表达，使重组CalB的表达水平较以原始Pcbh1启动子表达CalB的菌株C30/CalB提升约2.7倍，较启动子改造的菌株C30OExyr1/7IRCalB提高约1.18倍。本发明的方法有助于提升里氏木霉中重组蛋白表达量，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN116716278A
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202310708212.4
申请日：2023-06-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的内切多聚半乳糖醛酸酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对内切多聚半乳糖醛酸酶pePGB进行定点突变，获得的内切多聚半乳糖醛酸酶突变体D207N和E257C/N286C/D207N的热稳定性均得到了显著的提高。突变体在55℃下处理60min后，残余活力可达野生型的4.8～11.6倍。
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