公开(公告)号：CN106497845B

公开(公告)日：2019-08-06

申请号：CN201611149169.9

申请日：2016-12-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  张琳培 ,  王浩 ,  周正雄

IPC: C12N1/20 ,  C12P19/26 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种高产软骨素的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过在产软骨素的枯草芽孢杆菌中进行合成途径优化，即共表达UDP‑GlcUA途径和UDP‑GlcNAc途径中的关键酶基因，提高了软骨素的产量。本发明提供的重组枯草芽孢杆菌可满足医疗卫生和食品安全的要求，无内毒素和病原感染的风险；并可以使软骨素的积累达到最高，为6.06g/L，分子量为78.64kD。本研究为高产软骨素提供了新策略，一方面可应用于其它糖胺聚糖，另一方面为工业化大规模生产软骨素奠定了基础。

公开(公告)号：CN102559518B

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201110428735.0

申请日：2011-12-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  周正雄 ,  周景文 ,  堵国成

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/60 ,  C12N15/63 ,  C12P7/46 ,  C12R1/845

Abstract: 本发明公开了一种高产延胡索酸米根霉及其应用，属于遗传工程领域。本发明采用代谢工程手段，将来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中编码丙酮酸羧化酶的基因ScPYC1过量表达于发酵法生产延胡索酸的菌株Rhizopus delemar NRRL1526中，获得了一株丙酮酸羧化酶活性提高的重组菌R.delemar-pRS303H-PC，其丙酮酸羧化酶活性提高了5.4倍(达到4.59U/mg protein)；以葡萄糖为唯一碳源，发酵72h后，延胡索酸产量达到55.92g/L，是出发菌株的1.19倍，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102559518A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201110428735.0

申请日：2011-12-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈坚 ,  周正雄 ,  周景文 ,  堵国成

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/60 ,  C12N15/63 ,  C12P7/46 ,  C12R1/845

Abstract: 本发明公开了一种高产延胡索酸米根霉及其应用，属于遗传工程领域。本发明采用代谢工程手段，将来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中编码丙酮酸羧化酶的基因ScPYC1过量表达于发酵法生产延胡索酸的菌株Rhizopus delemar NRRL1526中，获得了一株丙酮酸羧化酶活性提高的重组菌R.delemar-pRS303H-PC，其丙酮酸羧化酶活性提高了5.4倍(达到4.59U/mg protein)；以葡萄糖为唯一碳源，发酵72h后，延胡索酸产量达到55.92g/L，是出发菌株的1.19倍，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN106754598B

公开(公告)日：2020-03-06

申请号：CN201611149201.3

申请日：2016-12-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  张琳培 ,  王浩 ,  周正雄

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12P19/26 ,  A61K31/727 ,  A61P7/02 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种高产肝素前体的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明在产肝素前体的枯草芽孢杆菌中，共表达了UDP‑GlcUA途径和UDP‑GlcNAc途径中的关键酶基因，获得了肝素前体产量及分子量均增大的重组菌株。当共表达tuaD，gtaB，glmU，glmM和glmS基因，摇瓶中肝素前体产量提高至2.89g/L，分子量为75.90kDa。通过在3L发酵罐中进行补料分批发酵，肝素前体的产量最终积累到7.25g/L，分子量为46.66kDa。本发明为工业化生产肝素奠定了基础。

公开(公告)号：CN107384990A

公开(公告)日：2017-11-24

申请号：CN201710600786.4

申请日：2017-07-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  周正雄 ,  堵国成 ,  李青

IPC: C12P19/26 ,  C12P19/18

Abstract: 本发明公开了一种体外酶法催化肝素前体制备肝素的方法，属生物医药领域。本发明提供了由纯生物酶法合成具有生物学功能的肝素五糖的方法。通过在基因的5’端融合麦芽糖融合蛋白或双亲短肽序列提高相应硫酸转移酶或变构酶的表达量及酶活，由此得到结构稳定、单一的凝血类药物。

公开(公告)号：CN106755205A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201610997085.4

申请日：2016-11-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  周正雄

IPC: C12P19/26 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12R1/19 ,  C12R1/84

CPC classification number: C12P19/26 ,  C12N9/13

Abstract: 本发明公开了一种酶法制备硫酸软骨素的方法，属生物医药领域。本发明制备硫酸软骨素是以软骨素为底物，经微生物细胞异源表达的软骨素4‑硫酸转移酶催化形成具有生物学活性的硫酸软骨素A或软骨素6‑硫酸转移酶催化形成具有生物学活性的硫酸软骨素C，并经酰基硫酸转移酶提供PAPS硫酸基供体及再生系统。本发明为生物学活性物质硫酸软骨素A和硫酸软骨素C的合成及工业化生产方式提供了新的途径。

公开(公告)号：CN106754598A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611149201.3

申请日：2016-12-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  张琳培 ,  王浩 ,  周正雄

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12P19/26 ,  A61K31/727 ,  A61P7/02 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种高产肝素前体的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明在产肝素前体的枯草芽孢杆菌中，共表达了UDP‑GlcUA途径和UDP‑GlcNAc途径中的关键酶基因，获得了肝素前体产量及分子量均增大的重组菌株。当共表达tuaD，gtaB，glmU，glmM和glmS基因，摇瓶中肝素前体产量提高至2.89g/L，分子量为75.90kDa。通过在3L发酵罐中进行补料分批发酵，肝素前体的产量最终积累到7.25g/L，分子量为46.66kDa。本发明为工业化生产肝素奠定了基础。