公开(公告)号：CN102732560A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201210225140.X

申请日：2012-07-02

Applicant: 扬州大学

Inventor： 袁玉国 ,  成勇

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人工锌指核酸酶表达载体及其构建方法和应用。所述的人工锌指核酸酶表达载体，是将SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示序列，分别插入到载体pMLM290、pMLM292上的Xbal/BamHI位点而获得。该载体可用于突变转基因细胞中的增强绿色荧光蛋白标记基因。该载体能高效地突变细胞中的增强绿色荧光蛋白标记基因，解决了删除或突变标记基因效率的问题，且操作方法简单、可靠，可为以后标记基因的删除或突变提供了一种新的高效的方法。

公开(公告)号：CN102358894A

公开(公告)日：2012-02-22

申请号：CN201110308200.X

申请日：2011-10-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 成勇 ,  袁玉国

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及应用乳腺上皮细胞制备乳腺特异性表达转基因动物的方法，该方法包括以下步骤：（1）将外源基因通过表达载体转染体外培养的乳腺上皮细胞，并应用催乳素3-8µM诱导表达；（2）筛选获得高效表达乳腺上皮细胞系；（3）高效表达细胞系进行一步或二步细胞核移植，获得乳腺特异性表达个体。本发明方法可提高转基因动物制备效率，应用该技术可以在细胞筛选阶段预测其转基因动物的表达特性，提高乳腺特异表达转基因动物制备效率3倍。由于整合的位置效应，获得的转基因个体表达几率在10-30%，并且可能出现低水平表达。应用这一技术系统可在制备转基因细胞的同时鉴定将要获得个体的表达潜能，从而获得更多的表达动物。

公开(公告)号：CN116064510A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202210805073.2

申请日：2022-07-08

Applicant: 扬州大学

Inventor： 袁玉国 ,  蔡何清 ,  李玲 ,  王佳林 ,  钟平

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及到一种基于CRISPR‑Cas9基因编辑技术的sgRNA序列选择，基因定点突变制备低过敏源猫的方法，具体的说是针对猫Fel d1 CH2基因第二外显子序列设计特异性sgRNA序列，将sgRNA和Cas9蛋白复合物电转染入猫原核期胚胎中定点突变Fel d1 CH2基因，改变表达的Fel d1蛋白抗原性，用于生产、培育低过敏源的猫,培育低致敏原猫可改善室内的过敏源，降低对猫过敏的人的过敏反应，有利于宠物主人的健康，尤其是对猫严重过敏的爱猫人士来说，饲养猫成为可能。基于CRISPR‑Cas9技术猫基因编辑技术平台的建立，有利于开展与人疾病相关的其他猫科动物模型的建立与应用，推动猫科动物疾病模型的发展，为科学家提供一种新的实验动物模型，促进猫科动物转基因抗病育种的发展。