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公开(公告)号：CN118979088A
公开(公告)日：2024-11-19
申请号：CN202410927510.7
申请日：2024-07-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种筛选鸡原始生殖细胞发生过程中泛素化修饰靶蛋白的方法，包括以下步骤：提取蛋白并进行胰酶消化；对胰酶消化中得到的肽段进行亲和富集；通过LC‑MS/MS分析亲和富集得到的修饰肽段并进行数据库搜索；样品重复性检验和蛋白差异修饰分析；泛素化功能及泛素化修饰靶点分析。本发明能够高效筛选鸡PGCs发生过程中泛素化修饰靶蛋白；方法简便高效，成本低廉；为研究鸡PGCs发生过程中泛素化的调控机制提供研究思路和理论基础，以解决体外获取鸡PGCs数量不足的问题，为家禽PGCs高效应用作铺垫；具有推广生产潜能和经济效益。
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公开(公告)号：CN116855444A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310819378.3
申请日：2023-07-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种鸡原始生殖细胞单克隆细胞系建立的方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过自制简易口吸管，用FAcs培养基对PGCs进行稀释，用口吸管分选单个PGCs，在5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱中进行培养，每三天换一次培养液，建立PGCs的单克隆细胞系；本发明提供的方法可以在普通实验室高效稳定建立鸡PGCs单克隆细胞系，且不需要复杂昂贵的仪器，分选和建系效率高，为研究鸡PGCs生物学特性提供了一种新的途径，为家禽的良种扩繁、基因修饰及修饰后筛选、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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公开(公告)号：CN116584478A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310464169.1
申请日：2023-04-26
Applicant: 扬州大学
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明涉及一种含羟乙基淀粉HES的临床用CEF冷冻保存液及其制备方法，包括以下步骤：（1）准备原料；冷冻保存液以每1000mL体积计，准备的原料包括DMSO 50 mL、6%羟乙基淀粉40ml、胎牛血清400mL，余量为F12/DMEM高糖培养基；（2）胎牛血清、F12/DMEM高糖培养基混合均匀；（3）向所得混合液中依次加入二甲基亚砜DMSO和6%羟乙基淀粉，混合均匀，得到含羟乙基淀粉HES的临床用CEF冷冻保存液。通过本发明，能够有效地解决应用现有的冷冻保存液冻存细胞后导致的复苏后细胞活力较低而无法直接应用的问题。该方法成本低且易操作，HES与DMSO联合应用，能够发挥渗透性和非渗透性两种冻存保护剂的协同作用，并配合添加胎牛血清（为细胞提供营养物质），形成了一个比较稳定的冷冻保护体系。
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公开(公告)号：CN111650327B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202010685235.4
申请日：2020-07-16
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N30/88
Abstract: 本发明涉及一种基于非标定量蛋白质组学技术寻找如皋黄鸡不同细胞或组织间差异表达蛋白的方法，包括以下步骤：（1）鸡不同细胞或组织的组织或细胞蛋白提取；（2）对步骤（1）中得到的不同组的细胞或组织蛋白进行胰酶酶解；（3）酶解后的细胞或组织蛋白进行液相色谱‑质谱联用分析；（4）对分析结果进行数据库搜库和注释分析。通过本发明，本发明的优越性在于：1、本发明能够较快的获得不同组织和细胞之间的差异表达蛋白。2、方法简单可行，可重复性强，结果准确。3、该方法适用于其他物种。
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公开(公告)号：CN114015786A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111348108.6
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N15/14
Abstract: 本发明涉及一种探究胚胎期肌肉细胞形成时间的方法,利用实时荧光定量PCR、流式细胞分析、间接免疫荧光等技术共同探索肌肉细胞形成时间，方法切实可行，可用以大量分析胚盘内肌肉细胞占多个细胞的比例，以及何时肌肉细胞形成并表达标记蛋白，对研究胚盘发育、肌肉细胞形成、建立肌肉细胞形成调控网络等有重要指导意义，极大地丰富了胚胎发育生物学研究；本发明可推广到采用不同种类家禽的胚胎期胚盘，分析胚盘内各种细胞何时形成并分化发育，为研究整体胚胎发育，解密遗传规律奠定基础；本发明鉴定方法更为简便、灵敏和高效，可以检测胚胎期基因和蛋白的微弱表达，能更加真实地反映目的细胞形成情况，也可以应用于其他禽类研究中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113265450A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110651659.3
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6858 , C12Q1/66
Abstract: 本发明涉及一种研究组蛋白H3K4me2酶/转录因子复合体调控靶基因转录的方法，查找目的样本中MLL2/ASH2L/DPY30/WDR5/RBBP5共同富集的基因，筛选出与目的样本相关的候选基因X用作后续实验；构建X基因启动子截短片段的双荧光素酶报告载体，转染293T细胞后，培养48h，收集样本进行双荧光素酶报告检测，确定核心启动区域；对核心启动区域进行生物信息学分析，利用jaspar在线网站，对核心区域可能存在的转录因子进行分析，获得与组蛋白甲基化酶结合区域相同的转录因子，作为候选复合蛋白；分别构建5个组蛋白甲基化酶的标签载体和转录因子的标签载体，利用pulldown实验，检测组蛋白甲基化酶与转录因子的结合；通过本发明，实验设计严谨，应用广泛，在不同生物学过程均适用。
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公开(公告)号：CN111965094A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010853561.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC-like细胞，将获得的PGC-like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC-like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC-like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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公开(公告)号：CN111944887A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010868373.6
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6879 , C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/74 , G01N1/28 , G01N1/30 , G01N1/38 , C12N15/867 , C12N15/12 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种鸡雌性性别决定基因的筛选和验证方法，旨在明确JUN基因在鸡雌性分化中的作用，为探明鸡的性别分化及性别控制技术奠定理论和实践基础。本方法适用于鸡性别基因的筛选和验证，验证结果合理准确，实验过程严密周谨。本发明可以证明JUN基因是鸡雌性性别决定的关键调控因子，在雌性分化过程中发挥重要作用。可用于禽类性别决定基因的筛选和验证，本研究为鸡性别控制技术提供了理论支撑，在鸡的养殖业最大化经济效益中奠定基础。此外，本发明中的性别基因筛选和验证方法也可以应用于其他禽类及动物研究中，具有很好的生产和科学研究意义。
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公开(公告)号：CN111925981A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010868114.3
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/6879 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供了一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法，旨在鸡胚孵化至4.5天时,取下生殖嵴，通过血液进行性别鉴定后分离出雌雄鸡胚的PGCs，将为早期干细胞的进一步应用奠定基础。本方法适用于家禽雌雄原始生殖细胞的分离，方法新颖科学，结果准确可靠。本发明可以准确的分离鸡雌雄原始生殖细胞，为PGCs在医学以及发育生物学、禽类嵌合体制备、转基因禽类的方面研究提供准确的原材料。此外，本发明中的细胞分离方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN111849873A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748573.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/02 , C12Q1/6888 , G01N33/68
Abstract: 一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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