一种单细胞RNA逆转录与文库构建的方法

    公开(公告)号:CN108103055B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201810019044.7

    申请日:2018-01-09

    Abstract: 本发明属于转录组分析领域,涉及到一种快速进行单细胞RNA逆转录与文库构建的方法。本发明能在5‑6小时内,由1‑2000个细胞或10pg‑20ng经提取的真核生物总RNA为起始,扩增出20‑500ng高质量全长双链cDNA,并获得符合下游分析要求的高质量cDNA文库。此发明有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和基因组DNA的污染,表达定量分子标签可辅助基因表达量计算,同时在完整扩增RNA序列信息的同时该表达定量分子标签还可保留链来源信息。本发明可获得95%以上的逆转录与扩增建库成功率,cDNA文库可无缝衔接Illumina主流测序平台,下机数据(5M Reads)可检测到90%以上的基因表达,基因表达一致性超过90%,扩增无明显偏倚,且需要的样本投入量更少。

    扩增DNA的方法
    13.
    发明公开

    公开(公告)号:CN111621548A

    公开(公告)日:2020-09-04

    申请号:CN202010490130.3

    申请日:2016-04-26

    Abstract: 本申请涉及一种扩增基因组DNA的方法,包括:(a)提供第一反应混合物,包括包含基因组DNA的样本、第一引物、核苷酸单体混合物和核酸聚合酶,其中所述第一引物从5’端到3’端包含通用序列和包括第一随机序列的第一可变序列;(b)将第一反应混合物置于第一温度循环程序获得预扩增产物;(c)提供第二反应混合物,包括预扩增产物、第二引物、核苷酸单体混合物和核酸聚合酶,其中所述第二引物从5’端到3’端包含或由特定序列及所述通用序列组成;(d)将第二反应混合物置于第二温度循环程序进行扩增,获得扩增产物。本申请还涉及一种用于扩增基因组DNA的试剂盒。

    一种微流控样本保存芯片及胚胎活检细胞处理方法

    公开(公告)号:CN114480083A

    公开(公告)日:2022-05-13

    申请号:CN202111575985.7

    申请日:2021-12-21

    Inventor: 任军 丁韬力 万成

    Abstract: 本发明提供了一种微流控样本保存芯片及胚胎活检细胞处理方法。该微流控样本保存芯片包括微流控样本保存芯片本体;本体设有与外界连通的活检细胞进样孔、胚胎培养液进样孔和出样孔,本体内设有第一流体通道、第二流体通道、混匀通道和存储仓,存储仓能够实现可视化;第一流体通道和第二流体通道的入口端分别与活检细胞进样孔和胚胎培养液进样孔连接、出口端均与混匀通道连接;混匀通道出口端与存储仓连接,存储仓出口端与出样孔连通。该微流控样本保存芯片通过第一流体通道、混匀通道、活检细胞进样孔、存储仓尺寸及相对位置控制实现自活检细胞进样孔加入的胚胎活检细胞通过虹吸作用自主进入存储仓中进行存储,并能够实现胚胎培养液样本的存储。

    一种目标区域多重PCR与快速文库构建的方法

    公开(公告)号:CN108103143B

    公开(公告)日:2021-11-09

    申请号:CN201711347145.9

    申请日:2017-12-15

    Abstract: 本发明属于遗传学与精准医学领域,涉及到一种靶向特异区段超高重PCR与快速文库构建的新方法。本发明能在2‑3小时内,由2.5‑50ng经提取的DNA为模板获得符合下游分析要求的高质量文库,并且在建库过程中引物端自动加上样本区分barcode,无需二次建库。下机数据各扩增子均一性高,1M Reads前提下,99.5%扩增子上的热点达到1200X覆盖;特异性高,100%的靶序列均能被有效扩增。本发明文库接头的添加具有方向性,可提高数据利用率和文库质量。

    一种用于检测EML4-ALK、ROS1和RET融合基因突变的方法

    公开(公告)号:CN108103175A

    公开(公告)日:2018-06-01

    申请号:CN201810001999.X

    申请日:2018-01-02

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,具体地涉及一种通过文库构建并测序一次性检测EML4‑ALK,ROS1和RET融合基因突变的方法。本发明能在3小时内,由1‑2000个新鲜组织细胞,10pg‑20ng经提取的总RNA,或血浆游离RNA为起始,在ALK,ROS1,RET特异性引物与逆转录酶的作用下对其中包含融合型信息的mRNA进行逆转录并获得cDNA第一链,而后以模板转换技术在cDNA的3’端添加一段接头序列(带有分子标签)并进行cDNA二链生成,而后以接头区段为引物锚定位点进行指数扩增的同时在cDNA两端加上Illumina文库接头,以获得符合下游分析要求的高质量cDNA文库。

    一种目标区域多重PCR与快速文库构建的方法

    公开(公告)号:CN108103143A

    公开(公告)日:2018-06-01

    申请号:CN201711347145.9

    申请日:2017-12-15

    Abstract: 本发明属于遗传学与精准医学领域,涉及到一种靶向特异区段超高重PCR与快速文库构建的新方法。本发明能在2‑3小时内,由2.5‑50ng经提取的DNA为模板获得符合下游分析要求的高质量文库,并且在建库过程中引物端自动加上样本区分barcode,无需二次建库。下机数据各扩增子均一性高,1M Reads前提下,99.5%扩增子上的热点达到1200X覆盖;特异性高,100%的靶序列均能被有效扩增。本发明文库接头的添加具有方向性,可提高数据利用率和文库质量。

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