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公开(公告)号：CN111944885B
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202010375167.1
申请日：2020-05-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种马尾松miRNA前体基因的克隆方法，属于植物分子生物学领域。本发明提供的马尾松miRNA前体基因的克隆方法，分别对miRNA前体基因的PCR扩增体系和PCR反应条件进行优化，退火温度控制在64‑68℃，循环次数为34‑35次，以及改变琼脂糖凝胶电泳的胶浓度、电压和电泳时间，实现成功高效地克隆马尾松miR172和miR947前体基因。本发明方法特异性强，目的基因的产量高，在前体基因的关键成熟序列区域无碱基错配现象，获得的前体基因序列与目的基因序列同源性高达100％。有利于进一步构建植物表达载体，用于转基因植物的培育，在农林作物遗传改良和分子育种方面具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN106967731B
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201710359117.2
申请日：2017-05-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/82 , C07K14/415 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种柽柳盐胁迫响应关键基因TcARF6及其应用，关键基因TcARF6的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。柽柳盐胁迫响应关键基因TcARF6的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以柽柳盐胁迫处理的柽柳为材料，通过RACE技术克隆了TcARF6基因。通过实时荧光定量检测技术，检测TcARF6基因在柽柳受到胁迫后的表达模式，验证其响应胁迫的关键性。同时，采用gateway技术构建其柽柳过量表达载体pH35GS‑TcARF6，在启动子P35GS的驱动下，TcARF6可在转基因内高效表达。盐胁迫响应过程中的TcARF6相对定量，表明TcARF6只在根中特异性迅速下调表达，验证了该基因在胁迫响应中关键作用，在林木转抗性育种领域有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN108384885B
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201810504433.9
申请日：2018-05-23
Applicant: 江西省科学院生物资源研究所 , 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种香樟SSR引物组合物及其品种鉴定方法，用于香樟品种的快速分子检测与鉴定，属于植物新品种分子鉴定领域。本发明设计了4对SSR引物，并利用它们成功构建了11个香樟品种指纹图谱，可快速、准确地区分各香樟品种。本发明基于4对SSR引物，进行一次PCR扩增反应，利用8％聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，利用引物组合法，可直接根据产物的片段进行判断。本发明可直接应用于香樟不同品种的分子鉴定，具有很好的实用性。
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公开(公告)号：CN110499278A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910915380.4
申请日：2019-09-25
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法，包括以下步骤：首先通过组合酶解液酶解银杏叶，得到银杏的原生质体；然后对得到的银杏原生质体进行分离、纯化，并且进行预处理，再利用PEG介导法将携带绿色荧光蛋白eGFP标签的p2FGW7.0质粒载体转入银杏原生质体中，经过培养，使其在银杏原生质体中表达。本发明构建得到银杏叶原生质体瞬时表达系统，操作简单易行，可以获得大量、完整、纯净的银杏叶原生质体，不受季节和地点的限制。本发明适用于银杏实生苗，利用幼嫩的叶即可得到较高质量的原生质体，原生质体活力可达90％，同时对于野外的成熟叶组织在一定程度上也适用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110184278A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910468211.0
申请日：2019-05-30
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2及其miRNA抗性靶标rTcNAC2和应用。所述的柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明通过大引物突变技术将TcNAC2基因的miR164响应元件同义突变，获得了miR164抗性靶标rTcNAC2，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。在盐胁迫下，TcNAC2受miR164的转录后调控，而rTcNAC2则不受其调控。柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2及其miR164抗性靶标rTcNAC2在植物耐盐性或林木抗性育种领域的研究和应用中有重要价值。
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公开(公告)号：CN109082429A
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201811018873.X
申请日：2018-08-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种杨树不定根和木质部发育的关键基因PeRBR及其表达蛋白和应用，该关键基因PeRBR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过将PeRBR基因转入杨树，过量表达PeRBR基因的转基因杨树不定根长度增加、侧根数目增多，而且不定根和茎的木质部厚度都明显增加。这表明PeRBR基因是杨树不定根和木质部发育的关键调节因子，在林木无性系育种和提高木材产量等方面有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN104946664B
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201510360679.X
申请日：2015-06-26
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种杨树耐盐有关基因PeHKT1及其表达蛋白和应用，该杨树耐盐重要基因PeHKT1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该杨树耐盐重要基因PeHKT1的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以南林895杨初生不定根为材料，通过RACE技术克隆了PeHKT1基因。同时，采用通路克隆技术构建其杨树过量表达载体pH35GS‑PeHKT1，该基因位于启动子P35S之后，在启动子P35S的驱动下，PeHKT1可在杨树体内高效表达，从而可提高杨树的抗盐性，所以PeHKT1基因是杨树响应盐胁迫的重要基因，在林木基因工程领域有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN105087813A
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201510605510.6
申请日：2015-09-21
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12Q1/6895
Abstract: 本发明公开了一种银杏品种分子检测引物组合物及其品种检测方法，专用于果用银杏品种的快速分子检测与鉴定，属于植物新品种分子鉴定领域。设计了8对SSR引物，并利用它们成功构建了48个果用银杏品种指纹图谱，可快速、准确地区分各银杏品种。本发明基于8对SSR引物，进行一次PCR扩增反应，利用8%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，利用引物组合法，可直接根据产物的片段进行判断。本发明可直接应用于果用银杏种水平的鉴定。
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公开(公告)号：CN101134965A
公开(公告)日：2008-03-05
申请号：CN200710025135.3
申请日：2007-07-13
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一个克隆自康乃馨CMB2基因的花特异性启动子、启动子的表达盒及其植物表达载体，此花特异性启动子可以驱动目的基因在转基因植物的花器官中高效特异表达，尤其是在花瓣和花丝中具有高效特异表达，而在根茎叶等营养器官中不表达。应用本发明的启动子在花卉基因工程中，可用来培育新奇，美丽，持久的康乃馨等花卉的新品系。
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