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公开(公告)号：CN1706942A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055548.2
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明属于生物制药领域中应用基因工程技术生产蛋白质药物的范畴。本发明公开了一种新的具有抑制血管生成及肿瘤生长和转移的尿激酶原Kringle结构域变体蛋白mUKK的制备方法和应用。其制备方法是用基因工程技术构建了表达mUKK的重组质粒，并实现了在大肠杆菌中的高效表达，经分离纯化后获得高纯度的具有抑制血管生成及肿瘤生长和转移的蛋白质药物，可用于肿瘤、肥胖、糖尿病和心脑血管疾病等血管生成异常相关的疾病的治疗。
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公开(公告)号：CN101906400A
公开(公告)日：2010-12-08
申请号：CN200910032910.7
申请日：2009-06-08
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明属于动物细胞系领域。本发明采用小鼠肺癌LLC-F0细胞株作为源细胞，通过C57BL/6J体内筛选和体外培养相结合的方法，建立了具有自发性肺转移表形的小鼠肺癌高转移细胞系LLC-F3。所述的鼠肺癌自发高转移倾向细胞亚系具有肺癌转移率高且恶性程度高的特点，是一种理想的研究肿瘤转移的模型，在揭示肺癌的转移机制和抗转移药物的筛选的应用中将有着广阔的前景。
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公开(公告)号：CN101900725A
公开(公告)日：2010-12-01
申请号：CN200910027214.7
申请日：2009-05-25
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
IPC: G01N33/543 , G01N33/72 , G01N33/577 , G01N21/64 , C12N9/72
Abstract: 本发明属于蛋白质或多肽检测领域，公开了利用正反馈酶反应放大体系检测痕量蛋白质或多肽的方法。该方法为对待测痕量蛋白质或多肽采用结合了正反馈酶促反应放大体系和酶反应动力学分析方法的酶联免疫吸附检测方法。该方法检测灵敏度可达1～50fmol/L，比常规ELISA的灵敏度提高4～5个数量级。
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公开(公告)号：CN1706946A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055550.X
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/16 , C12N15/70 , C07K1/14 , C07K14/435 , C07K14/575 , C07H21/00 , G01N33/68 , G01N33/74
Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，是一种重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定方法。本发明用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18－T载体中，经过KpnI/SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn－Sepharose亲和层析纯化以及复性处理，从每升菌液中可获得35mg硫氧还蛋白－胸腺肽α1融合蛋白。经凝血因子Xa酶切、Zn－Sepharose亲和层析以及反向高效液相色谱纯化获得3.8mg重组人胸腺肽。小鼠胸腺细胞凋亡实验表明，重组人胸腺肽能显著地抑制地赛米松诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡，且该抑制作用与重组人胸腺肽的浓度呈剂量依赖关系。
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公开(公告)号：CN1706944A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055547.8
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及一种治疗充血型心衰竭的多肽药物的表达、纯化及鉴定方法，属于生物技术制药中的基因工程生产多肽药物的技术领域。其目的是制备多肽药物重组人脑钠素(rhBNP)，用于治疗充血型心衰竭。重组人脑钠素(rhBNP)是用基因工程方法生产的多肽，利用硫氧还蛋白融合表达系统高效表达，经分离纯化获得目标多肽。体外活性测定结果表明，制备的重组人脑钠素(rhBNP)样品对兔胸主动脉条具有显著的血管舒张效应，具有和标准品相似的比活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1706943A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055551.4
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明涉及一种抑制尿激酶原(proUK)/尿激酶原受体(uPAR)相互作用的重组蛋白的制备方法和活性鉴定。由于uPA/uPAR在许多病理生理过程中发挥了重要的作用，阻断这一通路将会对疾病的发生和发展起到阻滞作用。本发明中制备的人尿激酶原氨基末端片段(ATF)通过体外活性鉴定表明其能够抑制尿激酶原与位于细胞表面的尿激酶原受体的结合。同时也能抑制尿激酶(UK)对纤溶酶原(plasminogen)以及纤溶酶(plasmin)对proUK的激活。这预示着rhATF可能在抑制uPA/uPAR参与的病理生理过程中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN101900725B
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN200910027214.7
申请日：2009-05-25
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
IPC: G01N33/543 , G01N33/72 , G01N33/577 , G01N21/64 , C12N9/72
Abstract: 本发明属于蛋白质或多肽检测领域，公开了利用正反馈酶反应放大体系检测痕量蛋白质或多肽的方法。该方法为对待测痕量蛋白质或多肽采用结合了正反馈酶促反应放大体系和酶反应动力学分析方法的酶联免疫吸附检测方法。该方法检测灵敏度可达1～50fmol/L，比常规ELISA的灵敏度提高4～5个数量级。
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公开(公告)号：CN1887296B
公开(公告)日：2011-05-25
申请号：CN200610040863.7
申请日：2006-07-31
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明公开了一种诱导抗肿瘤免疫的方法及其在制药中的应用。该方法利用103～104剂量活骨髓瘤FO细胞诱导抗肿瘤免疫；或者，利用GM-CSF转染的骨髓瘤FO细胞冻干粉诱导抗肿瘤免疫；或者，利用原代人脐静脉血管内皮细胞诱导抗肿瘤免疫；或者，利用肿瘤血管内皮细胞膜表面蛋白提取物诱导抗肿瘤免疫的方法。该方法可用于制备抗肿瘤药物。该方法操作简单，诱导抗肿瘤免疫效果好。
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公开(公告)号：CN101886066A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910027920.1
申请日：2009-05-13
Applicant: 南京大学
IPC: C12N9/68 , C12N15/63 , G09B23/28 , C12Q1/37 , C12Q1/02 , A61K38/49 , A61P25/00 , A61P25/28 , A61P7/02 , A61P9/10
CPC classification number: Y02A50/473
Abstract: 本发明涉及医药生物工程技术领域，包括组织型纤溶酶原激活物环饼结构-2多肽的制备及应用。本发明使用两种方法制备组织型纤溶酶原激活物环饼结构-2。方法一，人源组织型纤溶酶原激活物变体瑞替普酶(reteplase)作为原料，使用纤溶酶原(plasminogen)切割瑞替普酶(reteplase)得到由二硫键连接的环饼结构-2(kringle-2)和碳端丝氨酸蛋白酶组成的多肽。使用β-巯基乙醇限制性还原断裂二硫键，H2O2限制性氧化。用lysine-Sepharose 4B亲和层析进一步纯化环饼结构-2多肽。SDS-PAGE电泳检验蛋白纯度。方法二，利用PCR技术获得环饼结构-2基因，将其克隆至具有T7启动子的表达质粒pET29a中。重组质粒转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达，其产物以包涵体形式存在，通过体外复性，得到可溶性的环饼结构-2。在脑缺血后给予环饼结构-2，可降低脑卒中大鼠死亡率；减少脑梗死体积；降低内源tPA的表达；调节BBB开放模式，使得BBB在脑缺血后24小时BBB通透性降低，有效的防止了脑水肿发生；减少脑神经元凋亡。组织型纤溶酶原激活物环饼结构-2多肽主要用于脑卒中的治疗，也可用于脑损伤以及神经退行性病的神经保护。
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公开(公告)号：CN101884910A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910026561.8
申请日：2009-05-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 具有反式剪切活性的蛋白质内含子的N-端剪接结构域和C-端剪接结构域之间能够特异性结合。本发明用蛋白质内含子的一个剪接结构域(N-或C-端剪接结构域)作为载体蛋白与目标多肽融合表达；将另一个剪接结构域(C-或N-端剪接结构域)与支持介质交联，制备亲和柱，用来吸附并纯化上述含有目标多肽的融合蛋白。通过增加亲和层析柱洗涤液中的盐浓度，去除融合蛋白样品中的杂质；通过改变层析柱的pH、温度、或者加入含巯基基团的化学试剂，诱导蛋白质内含子的反式剪切，使目标多肽从融合蛋白中释放出来，并同时获得纯化。
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