公开(公告)号：CN116103376A

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202310110762.6

申请日：2023-02-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 杨守萍 ,  周强 ,  丁先龙 ,  王亮 ,  吴烁

IPC: C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种基于RCA和DNA聚合酶矫正反应的长链DNA扩增方法，包括：（1）构建多重置换体系A和置换程序，以环状dsDNA为模板，获得Exo‑primer和环状ssDNA的复合结构；（2）构建环化扩增体系B和扩增程序，以步骤（1）得到的复合结构为模板，进行单链环化扩增；（3）构建多重同时位移扩增体系C和扩增程序，以步骤（2）得到的单链环化扩增产物为模板，进行长链dsDNA的扩增，并对扩增产物中的Flags进行剪切形成cleavages；（4）构建DNA聚合酶矫正反应体系和程序，对步骤（3）中得到的产物进行非正常结构的修复。本发明方法可稳定的扩增约200kb的DNA片段，这在克隆、表达和靶向基因组测序等方面有许多应用；该方法极大的扩展了DNA扩增的容量，在生物领域有很大的应用潜力。

公开(公告)号：CN115717149A

公开(公告)日：2023-02-28

申请号：CN202211329795.1

申请日：2022-10-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 杨守萍 ,  周强 ,  丁先龙 ,  张浩

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供了一种pBeloBCA11‑MCS(+)重组质粒及其构建方法与应用，该重组质粒能在分子水平拓展低拷贝质粒载体pBeloBCA11的内切酶识别位点，提高pBeloBCA11质粒与目的片段重组，推动大片段基因组文库的构建和促进基因簇（gene cluster）相关研究方面的应用。

公开(公告)号：CN106489720A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201610956231.9

申请日：2016-10-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 盖钧镒 ,  聂智星 ,  杨守萍 ,  赵团结

IPC: A01H1/02 ,  A01H1/04

CPC classification number: A01H1/02 ,  A01H1/04

Abstract: 本发明公开了大豆质核互作雄性不育系NJCMS4A及其选育方法，属于农作物雄性不育系的选育技术领域；该不育系NJCMS4A是以大豆地方品种N23661作为母本，以大豆地方品种N23658作为父本，杂交得到F1代种子；得到F1代后与N23658进行回交；之后以回交后代为母本，N23658为父本，进行连续回交，而选育出的农艺性状与父本一致，且表现雄性不育的群体；其回交所用父本即为雄性不育保持系NJCMS4B，并找到了恢复系南圣9403，实现了“三系”配套。本发明为大豆质核互作雄性不育系的选育提供了新的细胞质来源即雄性不育细胞质N23661，拓宽了大豆质核互作雄性不育系的遗传基础。

公开(公告)号：CN116590278A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310058487.8

申请日：2023-01-17

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 杨守萍 ,  周强 ,  丁先龙 ,  杜婉清 ,  王宏杰

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种基于原位裂解和脉冲凝胶电泳相结合的叶绿体环状基因组的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）待提取作物的预处理，得到用于叶绿体细胞器提取的叶片；（2）将叶片快速浸入ET‑M‑D体系中10~20min，用W5‑3溶液清洗三次后，通过等差离心法和密度梯度离心法去除杂物，得到叶绿体粗提溶液；所述ET‑M‑D体系包括以下终浓度的成分：0.6M甘露醇，0.05MMES，0.03MTris和75%的乙醇；（3）使用叶绿体粗提溶液构建叶绿体细胞器包埋胶栓；（4）Et‑S裂解液结合NDS‑1体系裂解胶栓中的叶绿体细胞器；（5）通过脉冲场凝胶电泳分离纯化叶绿体基因组；（6）电洗脱回收叶绿体环状基因组；（7）利用RecBCDase体系清除电洗脱步骤中产生的断裂核酸片段。本发明所述方法可提取高纯度的Cir‑cpDNA。

公开(公告)号：CN106472301A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201610960298.X

申请日：2016-10-28

Applicant: 南京农业大学 ,  山西省农业科学院农作物品种资源研究所 ,  山西省农业科学院农业资源与经济研究所

Inventor： 盖钧镒 ,  代金英 ,  杨守萍 ,  张瑞军 ,  白志元 ,  卫一超 ,  卫保国 ,  张海平

IPC: A01H1/02 ,  A01G1/00

CPC classification number: A01H1/02 ,  A01G22/00

Abstract: 本发明公开了一种提高大豆不育系结实性的方法，属于农作物杂交种制种技术领域。其主要技术措施是：选择开花期清晨大豆叶片和花芽上无露水、日平均温度为20.2～26.0℃的种植环境；选择泌蜜量达0.18μL以上的母本不育系材料、花粉萌发率达75％以上的父本材料于春季播种；在大豆花泌蜜量高峰时段利用种植环境中利于大豆异交结实的自然昆虫群体进行异花传粉。本发明综合利用环境、昆虫和作物之间的协调关系，提高了大豆不育系结实性，加快了大豆杂交种子生产的产业化进程；本发明发现了最有利于大豆异交结实的自然昆虫群体，通过有目的地选择自然昆虫群体，大大地降低了网室放蜂的制种成本。