一种提高水稻性细胞基因组变异诱导效率的方法

    公开(公告)号:CN110583480A

    公开(公告)日:2019-12-20

    申请号:CN201910995181.9

    申请日:2019-10-18

    Abstract: 本发明公开了一种提高水稻性细胞基因组变异诱导效率的方法,属于植物育种技术领域。该方法包括如下步骤:水稻种子萌发后,待幼苗长出时移植在营养液中生长,控制其分蘖,只保留少数主茎;待水稻幼穗发育期,选取适宜的水稻主茎幼穗,用酒精棉球消毒幼穗苞叶表面,在幼穗上部位置慢慢注入浓度为0.01%~0.1%的化学诱变剂EMS,待药液从穗顶部中心孔溢出时,停止注射并等待5-10min,再次注入同浓度EMS,操作时不断对幼穗苞叶表面消毒;EMS处理的植株继续在营养液中培养,待水稻幼穗发育结实并收获全部种子,取样萌发后进行基因组测序,根据测序数据计算突变频率。该诱导方法处理水稻性细胞可获得更高的诱导效率,同时具有更高的安全性。

    一种批量提取水稻胚乳DNA的方法

    公开(公告)号:CN103436524B

    公开(公告)日:2016-03-30

    申请号:CN201310238655.8

    申请日:2013-06-17

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,公开了一种批量提取水稻胚乳DNA的方法。该方法包括如下步骤:S1.从水稻种子中切取胚乳;S2.将胚乳投入PCR板(T1板)孔中;S3.T1板每孔加入碱液,放入PCR仪中进行加热;S4.取出T1板,每孔投入钨合金珠及1×DNA抽提液;S5.将T1板重新置于PCR仪中进行加热;S6.取出T1板,振动;S7.将T1板放入离心机进行离心;S8.取出T1板,将上清液转移至另一PCR板(T3板)中,T3板每孔中预先加入双蒸水;S9.将T3板置于冰箱中保存。该方法快速、操作简单,可实现水稻胚乳DNA的批量提取。

    一种利用DNA熔解温度分析水稻稻瘟病抗性基因的功能标记

    公开(公告)号:CN103333886B

    公开(公告)日:2016-03-09

    申请号:CN201310238656.2

    申请日:2013-06-17

    Abstract: 本发明为一种利用DNA熔解温度分析水稻稻瘟病抗性基因的功能标记开发,属生物技术领域。本发明针对传统的水稻Pik基因测序的检测方法,提出一种利用DNA熔解温度分析水稻Pik基因的功能标记。本发明根据水稻等位基因Pik与pik在编码区第2173碱基的C/T变异(Pita为T,pita为C),设计功能标记Pik-C/T。利用该标记进行两轮PCR扩增,第一轮PCR以基因组DNA为模板,利用Pik-C/T-out引物扩增;第二轮PCR以稀释的第一轮PCR扩增产物为模板,利用Pik-C/T-in引物扩增。利用仪器检测第二轮PCR扩增产物DNA熔解温度,通过熔解温度高低区分Pik和pik序列差异,从而判别水稻材料的稻瘟病抗性。

    一种水稻空间诱变后代的育种方法

    公开(公告)号:CN103329798B

    公开(公告)日:2016-01-20

    申请号:CN201310230116.X

    申请日:2013-06-09

    Abstract: 本发明提供了一种水稻空间诱变后代的育种方法,属农业技术领域。本发明针对传统物理化学诱变技术诱变效应不理想、诱变后代育种效率不高的问题,提出一种水稻空间诱变育种方法。本发明利用返地式空间飞行器(飞船、返回式卫星、高空气球等)搭载水稻纯系干种子进行诱变,然后利用品质、抗性及分子手段对诱变形成的多个混合群体进行鉴定,筛选出诱变株系应用于育种,提高诱变育种效率。与物理化学诱变技术相比,本发明可在多个诱变混合群体中鉴定突变个体,避免了部分突变的丢失;此外,本发明从品质、抗性方面进行鉴定,避免了仅从肉眼判别的局限性,提高了诱变育种效率。

    一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记

    公开(公告)号:CN103333887B

    公开(公告)日:2015-09-30

    申请号:CN201310238711.8

    申请日:2013-06-17

    Abstract: 本发明为一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记开发,属生物技术领域。本发明针对传统的水稻Pita基因凝胶电泳的检测方法,提出一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记。本发明根据水稻等位基因Pita与pita在编码区第918氨基酸的G/T变异(Pita为G,pita为T),设计功能标记Pita-G/T。利用该标记进行两轮PCR扩增,第一轮PCR以基因组DNA为模板,利用Pita-G/T-out引物扩增;第二轮PCR以稀释的第一轮PCR扩增产物为模板,利用Pita-G/T-in引物扩增。利用仪器检测第二轮PCR扩增产物DNA熔解温度,通过熔解温度高低区分Pita和pita序列差异,从而判别水稻材料的稻瘟病抗性。

    一种提取净化土壤中八氯二丙醚的方法

    公开(公告)号:CN102662021B

    公开(公告)日:2014-09-24

    申请号:CN201210136110.1

    申请日:2012-05-04

    Abstract: 本发明公开了一种提取净化土壤中八氯二丙醚的方法,属于农药残留分析技术领域。本发明的提取净化方法是在土壤样品中加入正己烷-丙酮混合液,提取、离心,取上清浓缩,浓缩液过层析柱,用正己烷洗脱,收集洗脱液,浓缩,得到八氯二丙醚的提取液;所述层析柱由上至下依次填充3~4cm的无水硫酸钠,9~11cm的硅胶-浓硫酸混合物、3~4cm的无水硫酸钠、脱脂棉。本发明的提取方法步骤简单易操作,且提取液中的八氯二丙醚量最接近土样中的原始含量,为后续检测的准确性奠定了基础。

    一种水稻空间诱变后代的种植及收获方法

    公开(公告)号:CN103329769B

    公开(公告)日:2014-07-30

    申请号:CN201310230125.9

    申请日:2013-06-09

    Abstract: 本发明公开了一种水稻空间诱变后代的种植及收获方法,属农业技术领域。本发明针对传统的物理和化学诱变技术先收获诱变1代植株全部种子,然后从中随机选择形成诱变2代群体,导致工作量大、随机性强,且大量突变基因被遗弃的问题,提出一种水稻空间诱变后代种植及收获方法。本发明将经过空间诱变后的全部干种子浸种催芽后播种,利用密植控制分蘖,成熟期只收获稻穗特定部位种子形成诱变2代群体,提高诱变后代处理效率。与目前诱变后代处理技术相比,本发明减少了工作量、在一定程度上避免了部分突变基因型的遗弃,提高了诱变育种选择效率。

    一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记

    公开(公告)号:CN103333887A

    公开(公告)日:2013-10-02

    申请号:CN201310238711.8

    申请日:2013-06-17

    Abstract: 本发明为一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记开发,属生物技术领域。本发明针对传统的水稻Pita基因凝胶电泳的检测方法,提出一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记。本发明根据水稻等位基因Pita与pita在编码区第918氨基酸的G/T变异(Pita为G,pita为T),设计功能标记Pita-G/T。利用该标记进行两轮PCR扩增,第一轮PCR以基因组DNA为模板,利用Pita-G/T-out引物扩增;第二轮PCR以稀释的第一轮PCR扩增产物为模板,利用Pita-G/T-in引物扩增。利用仪器检测第二轮PCR扩增产物DNA熔解温度,通过熔解温度高低区分Pita和pita序列差异,从而判别水稻材料的稻瘟病抗性。

    一种提取净化土壤中八氯二丙醚的方法

    公开(公告)号:CN102662021A

    公开(公告)日:2012-09-12

    申请号:CN201210136110.1

    申请日:2012-05-04

    Abstract: 本发明公开了一种提取净化土壤中八氯二丙醚的方法,属于农药残留分析技术领域。本发明的提取净化方法是在土壤样品中加入正己烷-丙酮混合液,提取、离心,取上清浓缩,浓缩液过层析柱,用正己烷洗脱,收集洗脱液,浓缩,得到八氯二丙醚的提取液;所述层析柱由上至下依次填充3~4cm的无水硫酸钠,9~11cm的硅胶-浓硫酸混合物、3~4cm的无水硫酸钠、脱脂棉。本发明的提取方法步骤简单易操作,且提取液中的八氯二丙醚量最接近土样中的原始含量,为后续检测的准确性奠定了基础。

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