公开(公告)号：CN105018430A

公开(公告)日：2015-11-04

申请号：CN201510065393.9

申请日：2015-02-06

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 张守全 ,  白银山 ,  冯美莹 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  A61K35/28 ,  A61K39/00 ,  A61P43/00

Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白小公猪的骨髓细胞，培养液培养20-28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得细胞形态均一的F3代的长白仔猪bMSCs；利用携带LargeT慢病毒液侵染F3代的长白仔猪bMSCs，细胞筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；将稳定表达Egfp的细胞株，传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系。本发明获得了能支持猪bMSCs稳定培养的系统，促使细胞体外快速稳定增殖，并维持原代的生物学特征，证明得到了永生的长白仔猪bMSCs，可以深入研究猪bMSCs生物学性质和应用于药物或疫苗研发。

公开(公告)号：CN104611295A

公开(公告)日：2015-05-13

申请号：CN201510065471.5

申请日：2015-02-06

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 张守全 ,  白银山 ,  冯美莹 ,  张秀娟 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  A61K35/52 ,  A61P15/08

Abstract: 本发明公开了一种食蟹猴睾丸间质祖细胞永生系的建立方法，包括步骤：取食蟹猴睾丸组织，获取高比例的睾丸间质细胞，完全培养基培养20～28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至形态均一的呈现成纤维状生长的睾丸间质细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染睾丸间质细胞，然后进行荧光标记细胞筛选，传代至稳定表达Egfp的细胞株；再筛选稳定表达Egfp的细胞株，鉴定出睾丸间质祖细胞以后，继续传代50代以上，最终建立了食蟹猴睾丸间质祖细胞永生系。转入Large T的睾丸间质祖细胞细胞系体外传代已超过62代，表达睾丸间质细胞标志蛋白CYP11A1，CYP17A1和STAR，同时也表达Pdgfral和Lifr等间质干细胞的标记基因，细胞外形维持成纤维状，证明了获得了特征的睾丸间质祖细胞系。