公开(公告)号：CN1284856C

公开(公告)日：2006-11-15

申请号：CN200510085472.2

申请日：2005-07-21

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  李雪

Inventor： 韩烈保 ,  李雪 ,  刘君 ,  曾会明 ,  信金娜

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/89 ,  C12N15/82 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明一种建立多年生黑麦草高效基因枪转化体系的方法及其应用，通过调控基因枪轰击过程中的各影响因子，包括轰击愈伤组织块大小、金粉包被物、金粉直径、轰击高度、轰击次数等，以及筛选剂的筛选压和筛选时间，成功建立起多年生黑麦草的遗传转化体系。应用该转化体系在建立转基因多年生黑麦草中的用途和应用该转化体系得到的转基因抗旱、耐盐、耐低温多年生黑麦草植株。

公开(公告)号：CN1715418A

公开(公告)日：2006-01-04

申请号：CN200510085474.1

申请日：2005-07-21

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  信金娜

Inventor： 韩列保 ,  信金娜 ,  刘君 ,  曾会明 ,  李雪 ,  何宇锋

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/89 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明采用基因枪转化法对草地早熟禾胚性愈伤组织进行轰击，建立了一套完整、高效的遗传转化体系。适合于草地早熟禾的基因枪转化参数为：Ca(NO3)2+PEG4000包被质粒DNA；使用1μm金粉作为质粒DNA的载体；处理1(打枪高度6cm、轰击1次、无渗透处理)与处理5(打枪高度6cm、轰击2次、有渗透处理)进行轰击，转化效果最好。适合于转化愈伤筛选的抗生素浓度为100mg/L。运用此转化体系，成功将三种与干旱、盐胁迫有关的功能基因转入草地早熟禾愈伤组织中，获得了转基因植株。转化频率高达3.92％。

公开(公告)号：CN1715416A

公开(公告)日：2006-01-04

申请号：CN200510085470.3

申请日：2005-07-21

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  李雪

Inventor： 韩烈保 ,  李雪 ,  刘君 ,  曾会明 ,  信金娜

IPC: C12N15/82 ,  C12N5/04 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明一种高效获得多年生黑麦草转基因植株的农杆菌介导转化体系及其应用，包括以下步骤：通过高频再生体系获得胚性愈伤受体材料；供体菌株的培养；抑菌素浓度的确定；农杆菌转化条件的优化；转化愈伤的筛选培养和植株再生和抗性植株的分子检测。通过优化农杆菌转化时所涉及到的各项影响条件，包括菌液浓度、侵染时间、侵染条件、共培养时间、抑菌素的添加浓度等，提供了一种适用于多年生黑麦草的农杆菌介导转化体系。克服了现有农杆菌介导技术难以应用于禾本科植物遗传转化的缺陷，建立起了以胚性愈伤为受体材料的高效多年生黑麦草农杆菌介导转化体系。

公开(公告)号：CN1698423A

公开(公告)日：2005-11-23

申请号：CN200510085473.7

申请日：2005-07-21

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  信金娜

Inventor： 韩烈保 ,  信金娜 ,  曾会明 ,  刘君 ,  李雪

IPC: A01H4/00

Abstract: 本专利对草地早熟禾Baron、Mardona、Midnight品种进行了组织培养研究，表明选择成熟种子作为外植体诱导愈伤组织，消毒时运用磁力搅拌消毒，蒸馏水洗净后直接接种为宜；选择易碎、干燥的胚性愈伤进行继代培养，在8个月内能够保持其再生能力；再生2个月的组培苗，移栽到花盆中能够100％成活，在田间生长健壮；运用正交设计与单因素实验设计的方法，建立了三种草地早熟禾品种的高频再生体系，胚性愈伤诱导率高达31.67％，愈伤组织分化率高达56.67％。运用其中Baron品种的再生体系进行基因枪转化，获得了转DREB1A、BADH－CMO、CMO基因的转化植株。

公开(公告)号：CN1597968A

公开(公告)日：2005-03-23

申请号：CN200410057271.7

申请日：2004-08-30

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  曾会明

Inventor： 韩烈保 ,  刘君 ,  何宇锋 ,  陈其军 ,  信金娜

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明通过构建出植物双基因载体，运用转基因技术来将载体转入草坪草中，实现提高草坪草的抗性能力。在构建过程中，不仅考虑了双基因载体在单子叶植物方面的转化，而且还考虑了在双基因植物方面的转化，因此构建了两种含有不同启动子的载体，使双基因载体可以在单、双子叶植物中都可转化。主要通过以下步骤来实现这一目的：1.从本实验室已有质粒上获得CMO和BADH基因；2.运用实验室已有的载体和获得的两个基因，构建出带有不同启动子的单基因载体；3.经过多次不同的酶切和连接，得到两种含不同启动子的双基因植物表达载体；4.用得到的双基因植物表达载体转入大肠杆菌和农杆菌，为将来单子叶植株和双子叶植株基因转化打下基础。

公开(公告)号：CN100500856C

公开(公告)日：2009-06-17

申请号：CN200710064240.8

申请日：2007-03-07

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  齐春辉

Inventor： 韩烈保 ,  齐春辉 ,  梁小红 ,  刘君 ,  王维飞 ,  曾会明

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明提供了结缕草高频基因枪转化方法，建立了一套完整、高效的遗传转化体系。本发明基因枪法转化的具体参数是：选用直径为1μm的金粉、每枪250μg金粉+0.5μg DNA、5cm的轰击距离、轰击3次的基因枪转化参数，选择诱导4个月、继代培养25d左右的胚性愈伤组织进行基因枪轰击，靶材料在轰击前4h至轰击后12h间，培养于含有0.2M的甘露醇及0.2M的山梨醇高渗培养基上。本发明还进一步将可综合提高植物抗旱、耐寒、耐盐性的DREB1A基因转入日本结缕草胚性愈伤组织中，获得了转基因植株。并且确立了结缕草转化子的潮霉素筛选方案。

公开(公告)号：CN1963357A

公开(公告)日：2007-05-16

申请号：CN200610162117.5

申请日：2006-12-05

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  刘君

Inventor： 韩烈保 ,  刘君 ,  王月华 ,  梁小红 ,  曾会明

IPC: F26B5/16

Abstract: 本发明提供了一种快速干燥凝胶的方法，本发明方法采用乙醇作为脱水剂，脱去胶体中的水分，达到干燥的目的。用本发明方法对凝胶进行干燥，操作简单，成本低，并且凝胶不会产生开裂或不平整的现象，为节约实验成本、提高实验质量提供了有效实用的方法。

公开(公告)号：CN1715417A

公开(公告)日：2006-01-04

申请号：CN200510085472.2

申请日：2005-07-21

Applicant: 北京林业大学 ,  韩烈保 ,  李雪

Inventor： 韩烈保 ,  李雪 ,  刘君 ,  曾会明 ,  信金娜

IPC: C12N15/87 ,  C12N15/89 ,  C12N15/82 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明一种建立多年生黑麦草高效基因枪转化体系的方法及其应用，通过调控基因枪轰击过程中的各影响因子，包括轰击愈伤组织块大小、金粉包被物、金粉直径、轰击高度、轰击次数等，以及筛选剂的筛选压和筛选时间，成功建立起多年生黑麦草的遗传转化体系。应用该转化体系在建立转基因多年生黑麦草中的用途和应用该转化体系得到的转基因抗旱、耐盐、耐低温多年生黑麦草植株。