一种对虾病毒感染模型的建立方法

    公开(公告)号:CN102613112A

    公开(公告)日:2012-08-01

    申请号:CN201210062792.6

    申请日:2012-03-12

    CPC classification number: Y02A40/81

    Abstract: 本发明涉及一种对虾病毒感染模型的建立方法,包括:(1)WSSV病毒分离和保存液的制备;(2)不同浓度WSSV保存液感染凡纳滨对虾;(3)对虾累积死亡率观察法确定该次RNA干扰研究的对虾病毒感染量。通过本发明的方法建立的对虾病毒感染模型重现性好,RNA干扰研究结果可信度高;操作简便,判断标准明晰,不仅适用于RNA干扰的抗病毒研究,也可用于将来RNA干扰制剂在水产实践中的推广应用。

    一种池塘底泥样品高纯度总DNA的提取方法

    公开(公告)号:CN102260666A

    公开(公告)日:2011-11-30

    申请号:CN201010183580.4

    申请日:2010-05-24

    Abstract: 一种池塘底泥样品高纯度总DNA的提取方法,涉及分子生物学技术领域,本发明首先用EDTA缓冲液和PBS缓冲液预处理池塘底泥样品,然后进行底泥总DNA的粗提取,具体为:向底泥样品中加入适量石英砂、DNA提取缓冲液和蛋白酶K,37℃于摇床震荡20~30min,再加入SDS缓冲液混匀,65℃水浴60~90min,离心取上清;用等体积的氯仿-异戊醇抽提,离心,取水相;再用等体积的苯酚-氯仿-异戊醇抽提1~2次;加入冷乙醇和乙酸钠,-20℃放置2h,离心,收集DNA沉淀,经乙醇润洗后干燥,加入TE溶解,即得到池塘底泥总DNA的粗提液。本发明可用于PCR扩增、酶切和杂交等分子生物学操作。

    一种拟穴青蟹抗病性状的cSNP分子标记检测试剂盒及检测方法

    公开(公告)号:CN106811526B

    公开(公告)日:2020-10-16

    申请号:CN201710080581.8

    申请日:2017-02-15

    Abstract: 本发明涉及一种拟穴青蟹抗病性状的cSNP分子标记检测试剂盒及检测方法。本发明涉及水产动物分子辅助抗病育种技术领域,具体是一种拟穴青蟹SpALF6的cDNA序列中影响青蟹抗病能力的单核苷酸多态性cSNP分子标记,及其检测试剂盒和检测方法。本发明在鉴定出拟穴青蟹抗病因子SpALF6的基础上,通过进行序列比较,发现SpALF6的cDNA序列第215位核苷酸A与其变异体SpALF6‑V第222位核苷酸G互为非无意义突变位点。本发明以此突变位点为基础,建立方便、实用分子标记检测试剂盒并提供配套的RT‑PCR检测方法,检测结果可以作为判断青蟹抗病力大小的一个重要指标,在青蟹抗病力预测和分子辅助抗病育种方面具有重要意义。

    一种拟穴青蟹抗病性状的cSNP分子标记检测试剂盒及检测方法

    公开(公告)号:CN106811526A

    公开(公告)日:2017-06-09

    申请号:CN201710080581.8

    申请日:2017-02-15

    Abstract: 本发明涉及一种拟穴青蟹抗病性状的cSNP分子标记检测试剂盒及检测方法。本发明涉及水产动物分子辅助抗病育种技术领域,具体是一种拟穴青蟹SpALF6的cDNA序列中影响青蟹抗病能力的单核苷酸多态性cSNP分子标记,及其检测试剂盒和检测方法。本发明在鉴定出拟穴青蟹抗病因子SpALF6的基础上,通过进行序列比较,发现SpALF6的cDNA序列第215位核苷酸A与其变异体SpALF6‑V第222位核苷酸G互为非无意义突变位点。本发明以此突变位点为基础,建立方便、实用分子标记检测试剂盒并提供配套的RT‑PCR检测方法,检测结果可以作为判断青蟹抗病力大小的一个重要指标,在青蟹抗病力预测和分子辅助抗病育种方面具有重要意义。

    一种抗RNA病毒siRNA分子的设计方法

    公开(公告)号:CN102643815A

    公开(公告)日:2012-08-22

    申请号:CN201210063237.5

    申请日:2012-03-12

    Abstract: 本发明涉及一种抗RNA类病毒siRNA分子的设计方法,包括:(1)选择RNA病毒内部、序列保守的RNA依赖的RNA聚合酶作为siRNA的靶标;(2)利用siRNA设计软件生成抗RNA病毒的小RNA分子;(3)根据siRNA设计规则,筛选理论上高效的siRNA用于实验研究;(4)小RNA分子的抗病毒应用形式为含RNA聚合酶III启动子U6的表达质粒。运用本方法选择抗病毒靶标序列可显著提高获得高效抗病毒小RNA分子的几率,大幅缩小RNA干扰靶点的选择范围,提高工作效率,显著降低RNA干扰技术研究和应用成本。

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