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公开(公告)号：CN114656553A
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210267146.7
申请日：2022-03-17
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/08 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一株识别非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72蛋白的单克隆抗体、含有该单克隆抗体的试剂盒及其应用。其中，能够特异性识别并阻断ASFV P72抗体的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.45030的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验和WB试验，鉴定所得到的单克隆抗体特异性识别P72蛋白构象表位，阻断ELISA试验结果表明，该单克隆抗体可以竞争性阻断猪血清中ASFV抗体与P72蛋白结合。本发明以偶联HRP单克隆抗体为竞争抗体，建立了一种阻断ELISA方法，该ELISA方法可以特异性检测ASFV感染的猪血清中抗体水平，操作简便，特异性好，敏感性高。本发明为ASFV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。
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公开(公告)号：CN111057145B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT‑PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc‑145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111187781A
公开(公告)日：2020-05-22
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN111187781B
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN116444682A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310342828.4
申请日：2023-03-31
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/395 , A61K39/385 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体及其应用。所述的生物型蛋白降解靶向嵌合体由1至多个PRRSVnsp9纳米抗体nsp9nb及/或nsp2纳米抗体nsp2nb串联后再与E3泛素连接酶接头蛋白SPOP中BTB结构域融合后得到。本发明利用筛选出的特异性结合PRRSV关键复制酶Nsp2，Nsp9蛋白的纳米抗体，并用纳米抗体替代E3泛素连接酶复合体(SPOP)底物识别结构域，构建靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体。本发明的提出为PRRS的治疗以及抗PRRS育种提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN109536456B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN201811261025.1
申请日：2018-10-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。
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公开(公告)号：CN109536456A
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201811261025.1
申请日：2018-10-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术开发公司
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体及其在定性及定量检测PCV2病毒样颗粒中的应用。其中，能够特异性识别猪圆环病毒2型病毒样颗粒的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.15793的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验鉴定所得到的单克隆抗体3H9的特异性，结果表明该单克隆抗体可以特异性识别PCV2病毒粒子，并且能够与PCV2 VLPs反应，而不与线性cap蛋白包被的ELISA板反应。因此，本发明建立了一种可以同时定性和定量分析PCV2 VLPs的简便方法，解决了PCV2 VLP粒子结构检测仪器昂贵，操作困难以及定量方法不能区分非特异性蛋白和破碎亚基的问题。
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