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公开(公告)号：CN113801854A
公开(公告)日：2021-12-17
申请号：CN202110995235.9
申请日：2021-08-27
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了分泌欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(European type Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,EU‑type PRRSV)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其应用，还公开了由该杂交瘤细胞系分泌的抗欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的特异性单克隆抗体及竞争ELISA方法的建立。该杂交瘤细胞系命名为EU1，其微生物保藏号是：CGMCC NO.23019。本发明的杂交瘤细胞系能够稳定分泌特异性识别EU‑type PRRSV的单克隆抗体，可用于特异性针对EU‑type PRRSV的竞争ELISA方法的建立。本发明的EU1杂交瘤细胞系及其分泌的单克隆抗体可以用于制备竞争法抗体诊断试剂盒，基于EU1建立的抗体鉴别诊断试剂盒可以区分EU‑type PRRSV和其它类型PRRSV的感染。
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公开(公告)号：CN111057145B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT‑PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc‑145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN111187781A
公开(公告)日：2020-05-22
申请号：CN201910863646.5
申请日：2019-09-12
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C07K14/01 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/12 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因及其在制备病毒样颗粒中的应用。本发明经优化后的猪圆环病毒3型衣壳蛋白全长基因如SEQ ID NO.1所示，该序列是针对大肠杆菌表达系统进行的部分优化。与密码子全部优化或不优化相比，该序列能够高水平表达重组蛋白，并能够组装成完整的病毒样颗粒。本发明还公开了制备病毒样颗粒的方法，涉及猪圆环病毒3型衣壳蛋白基因的优化、基因的克隆及其在大肠杆菌中表达，以及重组蛋白的纯化及病毒样颗粒的制备。本发明简单易行，成本较低，实现了猪圆环病毒3型衣壳蛋白在大肠杆菌中稳定表达，表达的重组衣壳蛋白可自组装形成病毒样颗粒，为猪圆环病毒3型的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN105018431A
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201510333158.5
申请日：2015-06-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一株分泌CAV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株7D7、由该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。所述杂交瘤细胞株7D7保藏编号为CGMCC No.10877。间接免疫荧光结果表明：7D7杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能特异性识别CAV-2病毒而与MDCK细胞不反应。本发明制备的7D7与2C1分泌的单克隆抗体的叠加实验结果表明：这两个单克隆抗体为针对CAV-2病毒不同抗原表位的。本发明所制备的单克隆抗体能很好的和CAV-2反应，可用于临床分离毒株的鉴定。本发明所制备的7D7单克隆抗体和另一株2C1单克隆抗体是识别CAV-2的两个不同抗原决定簇的单抗，因此说明本发明的单克隆抗体能用于检测CAV-2病原免疫胶体金试纸条的制备和双抗体夹心ELISA方法的建立。
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公开(公告)号：CN101805723A
公开(公告)日：2010-08-18
申请号：CN200910205503.1
申请日：2009-10-20
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
Abstract: 本发明公开了谷氨酸脱氢酶蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明将链球菌GDH基因的抗原性和疏水性进行分析，去除信号肽和跨膜区域后设计一对引物对GDH基因进行克隆，以大肠杆菌成功表达了WC-SS7的GDH蛋白，将纯化的GDH重组蛋白免疫BALB/c小鼠，获得了能和GDH蛋白反应的能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞系，其微生物保藏号是：CGMCC No.3343；所获得的重组GDH蛋白及特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究，为猪链球菌临床感染血清学诊断方法的建立奠定基础。本发明对于进一步研究谷氨酸脱氢酶在猪链球菌致病机制中的作用，以及建立猪链球菌检测方法等方面有重要的价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110484516B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN201910842743.6
申请日：2019-09-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
IPC: C12N7/01 , C12N15/113 , C12N15/70 , C12N15/66 , C12N15/90
Abstract: 一种用CRISPR系统将量子点标记至病毒核酸的方法和应用，它涉及病毒领域，本发明的目的是为了解决可视化研究伪狂犬病病毒中，采用目前已有方法将量子点标记至伪狂犬病病毒囊膜上，很有可能影响病毒对宿主细胞的侵染性的问题，本发明提出了一种量子点标记病毒核酸的新方法，标记后观察PRV侵入宿主细胞的动态过程，有望揭示PRV对宿主细胞的侵染机制，为我国猪伪狂犬病的防控研究提供理论依据，本发明应用于伪狂犬病病毒领域。
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公开(公告)号：CN109517797A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811201822.0
申请日：2018-10-16
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种表达猪繁殖障碍与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)受体CD163的猪永生化的肺泡巨噬细胞细胞系，所述的细胞系命名为PAM-Tang-20，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.13591。实验证明，本发明建立的细胞系能够高表达CD163受体，是PRRSV的易感细胞，可以广泛应用于PRRSV的增殖、PRRSV临床毒株的分离、疫苗生产以及PRRSV相关基础研究等。本发明的提出为猪繁殖障碍与呼吸综合症病毒的体外培养提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN104762244B
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201510058245.4
申请日：2015-02-04
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌SBP_bac_5基因缺失株及其构建方法与应用。所述缺失株为不含抗性标记的SS△SBP_bac_5，保藏编号为：CGMCC No.10076。本发明是采用RecA同源重组系统，利用温敏自杀质粒pSET4s作为载体对猪链球菌7型菌株SBP_bac_5编码的基因进行敲除而得到的菌株，破坏了SBP_bac_5蛋白的表达。本发明得到的S.suis 7型SS△SBP_bac_5株比亲本株的毒力弱，对动物安全。用重组菌制成疫苗，免疫CD1小鼠，实验结果表明：该猪链球菌重组菌疫苗能有效诱导机体产生特异性的体液免疫应答，使免疫小鼠获得抗S.suis攻击的保护，并可有效阻止细菌在体内的增值。本发明得到的工程菌为猪链球菌疫苗的研制提供了重要依据。
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公开(公告)号：CN105420249A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510960640.1
申请日：2015-12-17
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
CPC classification number: C07K14/005 , C12N7/00 , C12N15/815 , C12N2770/28122 , C12N2770/28123 , C12N2770/28152
Abstract: 本发明公开了一种基因4型猪戊型肝炎病毒结构区衣壳蛋白基因及其在制备猪戊型肝炎病毒样颗粒中的用途。本发明的经改造后的基因4型猪戊型肝炎病毒结构区衣壳蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明同时公开了该基因表达的重组蛋白及制备病毒样颗粒的方法，具体涉及基因4型猪戊型肝炎病毒结构区衣壳蛋白基因的改造、基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达，以及重组蛋白形成病毒样颗粒的制备和扩大培养条件等操作方法的改进等步骤。本发明简单易行，成本较低，实现了基因4型猪戊型肝炎病毒结构区衣壳蛋白在毕赤酵母中稳定分泌表达，表达的重组衣壳蛋白可自包装形成病毒样颗粒，为猪戊型肝炎病毒的抗体检测及亚单位疫苗的研制提供了基础。
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公开(公告)号：CN104762244A
公开(公告)日：2015-07-08
申请号：CN201510058245.4
申请日：2015-02-04
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪链球菌SBP_bac_5基因缺失株及其构建方法与应用。所述缺失株为不含抗性标记的SS△SBP_bac_5，保藏编号为：CGMCC No.10076。本发明是采用RecA同源重组系统，利用温敏自杀质粒pSET4s作为载体对猪链球菌7型菌株SBP_bac_5编码的基因进行敲除而得到的菌株，破坏了SBP_bac_5蛋白的表达。本发明得到的S.suis 7型SS△SBP_bac_5株比亲本株的毒力弱，对动物安全。用重组菌制成疫苗，免疫CD1小鼠，实验结果表明：该猪链球菌重组菌疫苗能有效诱导机体产生特异性的体液免疫应答，使免疫小鼠获得抗S.suis攻击的保护，并可有效阻止细菌在体内的增值。本发明得到的工程菌为猪链球菌疫苗的研制提供了重要依据。
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