一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法

    公开(公告)号:CN105684904A

    公开(公告)日:2016-06-22

    申请号:CN201610076172.6

    申请日:2016-02-03

    Abstract: 本发明提供了一种通过离体培养白桦花药获得单倍体再生植株的方法。首先确定花药中小孢子处于单核靠边期后,采集雄穗经消毒,用普通豆浆机粉碎。在超净工作台内分别以40目和60目网筛过筛,除去大于和小于花药的杂质,快速获得大量无菌花药。花药接种于在MS+40mg/L蔗糖+2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT条件下培养4周获得的愈伤组织最好;该愈伤组织在MS+30mg/L蔗糖+2.0mg/L BA+0.5mg/L KT分化培养条件下分化的不定芽最多;不定芽在WPM+0.4mg/L IBA+0.2mg/L NAA培养基中诱导生根。将根尖取下用饱和对二氯苯预处理4h后,经染色制片,光学显微镜观察到染色体收缩效果最佳且分散。获得3个染色体数为14的单倍体株系。

    一种利用MeJA和SA提高白桦细胞中白桦酯醇和齐墩果酸含量的方法

    公开(公告)号:CN102943104A

    公开(公告)日:2013-02-27

    申请号:CN201210462075.2

    申请日:2012-11-16

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种利用MeJA和SA提高白桦细胞中白桦酯醇和齐墩果酸含量的方法。以白桦组培苗茎段接种于NT+0.1mg/L 6-BA和0.01mg/L TDZ培养基诱导白桦愈伤组织,经多次继代、筛选和悬浮培养获得总三萜含量高的白桦悬浮细胞。将上述筛选细胞接种于相同液体培养基中,接种量为3g/100ml,震荡培养第七天分别添加100uM/L MeJA和50mg/L SA,此后24h-48h收获,检测细胞中总三萜、白桦酯醇和齐墩果酸含量。两种处理总三萜含量比对照提高21.6%~31.7%,齐墩果酸含量分别比对照提高277.41%~369.34%,白桦脂醇含量分别比对照提高44.42%~179.58%。该申请发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦酯醇和齐墩果酸药物提供了一种新途径。

    一种通过体细胞胚及次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法

    公开(公告)号:CN101548646B

    公开(公告)日:2011-12-07

    申请号:CN200910072102.3

    申请日:2009-05-25

    Abstract: 本发明提供了一种通过体细胞胚和次生体细胞胚发生途径快繁龙牙楤木的方法。本发明以龙牙楤木幼苗的叶子、叶柄和根段为外植体,在IBA浓度分别为3.0mg/L、2.0mg/L、0.3mg/L和2%蔗糖的SH培养中暗培养35天,三种外植体的体细胞胚诱导率都可达到100%,且平均每个外植体都产生较多的体细胞胚数(8.6-11.3个)。蔗糖浓度和IBA都可以影响次生体细胞胚的产生,在3.0mg/L IBA+2%蔗糖+SH培养基的培养条件下,中暗培养4周后,100%的体细胞胚上都有次生体细胞胚生成。将获得的成熟初生体细胞胚和次生体细胞胚转入无激素的WPM培养基中,都可迅速萌发生长为小苗。约5cm的健壮小苗移栽土壤中,成活率可达89%。本发明提供的培养简单、再生周期短、可持续获得再生植株的方法,可用于龙牙楤木苗木产业化生产。

    一种通过组织培养无性快繁拧筋槭苗木的方法

    公开(公告)号:CN114711143A

    公开(公告)日:2022-07-08

    申请号:CN202210422027.4

    申请日:2022-04-21

    Abstract: 一种通过组织培养无性快繁拧筋槭苗木的方法,属于林业生物技术领域。主要技术过程为:取早春的拧筋槭休眠芽为外植体,在添加植物生长调节剂的DKW培养基中,休眠芽萌发且有不定芽分化,且有的生长拔节;利用拔节的腋芽作为为外植体,诱导腋芽萌发生长,生长拔节的腋芽可以再次作为外植体进行萌发繁殖。这些萌发腋芽的顶芽在添加生长素类植物生长调节剂的1/2DKM培养基中,诱导生根,形成整齐一致、完整的再生植株,经过练苗后移入土壤生长,可用于造林。通过休眠芽、腋芽途径获得的拧筋槭再生植株能很好地继承母本性状,并且这样生产的苗木更加整齐、壮实。

    一种利用氢气提高白桦细胞中总三萜和白桦脂醇含量的方法

    公开(公告)号:CN104087644B

    公开(公告)日:2018-04-27

    申请号:CN201410270442.8

    申请日:2014-06-18

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种利用氢气提高白桦细胞中总三萜和白桦脂醇含量的方法。以白桦悬浮细胞为材料,按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中,附加0.1~0.3mg/L6‑BA和0.5~4.0mg/L TDZ,蔗糖20g/L,酸水解酪蛋白1g/L,pH5.5~6.0。在细胞悬浮培养第8天通入氢气使其终浓度为0.5‑1.5mmol/L,培养12h后收获,白桦脂醇含量最高为1.11mg/gDW,是对照组185.1%。培养24h后收获,细胞内总三萜含量达到24.37mg/gDW,为对照组的181.32%。氢气具有无毒无害的优势,方便代谢产物的分离和纯化。该发明为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦三萜和白桦脂醇药物提供了一种新途径。

    一种利用温度处理提高白桦丛生苗总三萜、齐墩果酸和黄酮含量的方法

    公开(公告)号:CN103430849B

    公开(公告)日:2015-08-26

    申请号:CN201310372994.5

    申请日:2013-08-24

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种利用温度处理提高白桦丛生苗中总三萜、齐墩果酸和黄酮含量的方法。以白桦愈伤组织接种于NT+2mg/L 6-BA的固体培养基诱导白桦丛生苗,继代两次后转移至NT+0.5mg/L 6-BA固体培养基,筛选获得总三萜含量高的白桦丛生苗。将上述筛选丛生苗接种于NT+0.5mg/L 6-BA液体培养基中,接种量为5g/100ml,震荡培养第七天分别进行高温45℃和低温4℃胁迫处理,此后24h-48h收获,检测丛生苗中总三萜、总黄酮和齐墩果酸含量。两种温度胁迫处理总三萜含量比对照提高49.20%~5.03倍,最高含量达59.66mg/g;齐墩果酸含量比对照提高3.68倍~10.56倍,最高含量达2.33mg/g;总黄酮含量对照提高10%~38.37%,最高达4.0mg/g。该申请发明无污染、低成本、可操作性强,效率高,为解决天然植物药物来源紧缺和工业化大规模生产白桦总三萜和齐墩果酸药物提供了一种新技术。

    一种利用小型简易生物反应器培养人参不定根生产人参皂苷的方法

    公开(公告)号:CN102898493A

    公开(公告)日:2013-01-30

    申请号:CN201110214567.5

    申请日:2011-07-29

    Abstract: 本发明提供了一种利用小型玻璃生物反应器(3~10L)培养人参不定根的方法。首先将长度约1.0cm的人参不定根培养在装有2.0L 1/2SH培养基的3L反应器内培养,该培养基含3.0mg/L IBA和20g/L蔗糖。定期分析人参不定根的生长和三种人参皂苷(Rg1、Re、Rb1)的累积,确定了人参不定根在生物反应器内的最佳收获周期为7周。3L生物反应器培养基中三种蔗糖浓度(20g/L、40g/L、60g/L)中,20g/L、40g/L两个浓度的蔗糖对人参不定根的人参不定根的生长和皂苷的累积优于60g/L蔗糖,两者无显著差别,但从节约角度考虑,应该选择20g/L蔗糖浓度用于生产。该浓度下,人参皂苷含量和产量分别为5.16mg/g、30.71mg。5和10L生物反应器内在初始接种量分别为:10、15、20g和20、25、30g中,最佳量分别为15和30g,其不定根的生长量分别为9.29和19.17g,皂苷含量分别为5.16和4.58mg/g。生物反应器内培养7周的人参与栽培4年的人参相比,人参皂苷Rg1和Re含量相差不大;栽培人参中Rb1的含量远高于生物反应器中培养得人参不定根中的含量。本发明可为人参不定根的小规模和进一步扩大化培养提供技术支持和参数,也可以作为大规模生产提供人参不定根种子生产方法。

    一种通过培养龙牙楤木体细胞胚生产有用次生代谢物质的方法

    公开(公告)号:CN102893858A

    公开(公告)日:2013-01-30

    申请号:CN201110214552.9

    申请日:2011-07-29

    Abstract: 一种通过培养龙牙楤木体细胞胚生产有用次生代谢物质的方法,其特征是:1)从无菌实生苗根段获得的胚性愈伤组织分别在分化培养条件和增殖培养条件下进行摇瓶悬浮培养;2)根据体细胞胚不同发育状况定期取材,并计算它们的生物生长量;3)分析体细胞胚各发育时期材料中楤木总皂苷、齐墩果酸、总黄酮的累积;4)体细胞胚苗中各成分含量最高,总皂苷占栽培植株根中含量的29.7%;齐墩果酸占栽培植株根中含量的29.9%;总黄酮占栽培植株叶中含量的42.8%,且体细胞胚苗中三种物质累积效率最高,分别为:总皂苷6.72mg/周、齐墩果酸3.42mg/周、总黄酮7.36mg/周。

    龙牙楤木激素自养型细胞系

    公开(公告)号:CN101629161B

    公开(公告)日:2012-02-01

    申请号:CN200910072196.4

    申请日:2009-06-05

    Abstract: 本发明属于植物生物技术领域。利用龙牙楤木(Aralia elate Seem.)幼苗的叶子和根为外植体,在MS+2,4-D(0.1-5.0mg/L)+蔗糖(2%)的培养基中诱导获得了一个松散、生长快速的黄色激素自养型细胞系Aral-1。该细胞系在无外源激素的1/2MS培养基中生长3周的鲜重和干重都增长约11倍;用紫外分光光度计测定其总皂苷和总黄酮含量分别为7.10%,1.51%%。其中总皂苷含量明显比激素依赖型的白色愈伤组织中的高,与对照野生叶柄中的总皂苷含量相差不大,是野生叶总皂苷的60%;总黄酮含量明显比激素依赖型的白色愈伤组织和野生叶柄中的高,是野生叶总黄酮的68.9%。该细胞系具有无激素快速生长、液体中良好分散相和相对较高药用成分含量等特点,可作为细胞规模化培养生产药用成分的材料。

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