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公开(公告)号：CN104593407B
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201510005584.6
申请日：2015-01-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及树干毕赤酵母基因表达系统及其构建与应用，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’‑3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19‑Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为树干毕赤酵母。本发明的表达载体可实现在树干毕赤酵母中的整合型稳定表达，对树干毕赤酵母的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN106636177A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201710043801.X
申请日：2017-01-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一个Candida amazonensis的FLP/FRT基因敲除系统，属于基因工程技术领域。本发明将FLP重组酶基因置于严格诱导型启动子SpGAL1p或SpMAL1p下调控，并在FLP表达盒和抗性标记表达盒两端添加同向重复的FRT位点，以PDC为靶基因构建基因敲除盒整合到Candida amazonensis基因组中，后续通过添加诱导剂诱导FLP表达，实现抗性基因的切除。本发明首次实现了Candida amazonensis的无标记基因敲除，并可以用于连续敲除多个基因，为Candida amazonensis的代谢工程改造提供了强有力的技术手段。
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公开(公告)号：CN103757035B
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201410040528.1
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆入表达载体pKLAC1构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，再利用pKLAC1通用引物筛选出多拷贝转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在乳酸克鲁维酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，可应用于食品、医药等领域。
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公开(公告)号：CN104099253B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410329652.X
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 一种基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法，包括以下步骤：（1）将黑曲霉孢子液接种至种子培养基，培养制备成熟的种子液；（2）成熟的种子液经过分散器处理，得到分散菌丝种子液；（3）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量转接至发酵培养基发酵，当发酵培养基还原糖浓度低于0.5%时发酵结束；（4）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量接种至种子培养基，培养制备得到下一级成熟的种子液，然后回到步骤（2），即实现黑曲霉种子连续培养。本发明提供的黑曲霉种子连续培养方法，能直接减少黑曲霉孢子繁琐的培养过程，同时可以有效缩短成熟种子培养时间，提高原料利用率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104593407A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510005584.6
申请日：2015-01-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及树干毕赤酵母基因表达系统及其构建与应用，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’-3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19-Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为树干毕赤酵母。本发明的表达载体可实现在树干毕赤酵母中的整合型稳定表达，对树干毕赤酵母的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN104561081A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510005585.0
申请日：2015-01-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一株能够利用木糖的酵母Candida amazonensis的表达系统，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’-3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19-Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为Candida amazonensis。本发明的表达载体可实现在Candida amazonensis中的整合型稳定表达，对木糖利用酵母Candida amazonensis的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN103211035B
公开(公告)日：2014-11-05
申请号：CN201310125662.7
申请日：2013-04-12
Applicant: 江南大学
IPC: A23C19/032
Abstract: 本发明公开一种液态型凝乳酶制剂的制备方法。包括以下步骤：（1）以解淀粉芽孢杆菌CCTCCNO：M2011045或枯草芽孢杆菌CCTCCNO：M2010259为发酵菌株制备发酵液；（2）板框压滤，固液分离；（3）蒙脱石吸附；（4）微滤；（5）超滤浓缩；（6）向浓缩酶液中添加终浓度20~40%（w/v）的蔗糖或海藻糖，终浓度10~30%（w/v）的甘油或山梨醇以及终浓度0.01~0.05%（w/v）的氯化钙，混匀，制得成品。本发明方法凝乳酶活力回收率高，同时能有效去除酶液中的蛋白酶等杂质和残留菌体，所制酶制剂具有良好的品质和稳定性，酶专一性强，保存期长，安全无毒。
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公开(公告)号：CN104087624A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410329786.1
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 宜兴协联生物化学有限公司
Abstract: 一种黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法，包括以下步骤：（1）黑曲霉经过逐级扩大培养，获得成熟的孢子；（2）孢子液接种至种子培养基，培养成为成熟的种子液；（3）成熟的种子液转接至发酵培养基F1；（4）发酵培养后，分割发酵液为两部分；其中一部分发酵液继续发酵完毕，获得柠檬酸；（5）分割出的另一部分发酵液经分散器分散处理，获得分散菌丝的发酵液；（6）将分散菌丝发酵液接入发酵培养基F2；发酵培养后，回到步骤（4），如此重复实现连续发酵。本发明显著降低生产成本与运行成本，显著缩短生产周期，提高生产效率；同时提高设备利用率，降低劳动强度，过程简便易操作，可以广泛应用于柠檬酸的生产。
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公开(公告)号：CN102517269B
公开(公告)日：2014-02-19
申请号：CN201110420007.5
申请日：2011-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种基于两阶段溶氧控制策略生产凝乳酶的方法，属于微生物发酵技术领域。本发明采用解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefacines）CCTCCNO：M2011045为生产菌株，所用发酵培养基以克/升计为：葡萄糖5-20，麸皮10-30，氯化钠6，七水硫酸镁4.5，磷酸二氢钾1，碳酸钙3，用自来水配制，pH值自然，121℃灭菌30min；在发酵第一阶段（0-16h）将氧体积传质系数（KLa）控制在72.2h-1，发酵第二阶段（16h以后），将氧体积传质系数（KLa）控制在33.9h-1。采用本发明提供的方法，可以有效的提高解淀粉芽孢杆菌发酵产酶水平，缩短发酵时间18小时以上，同时也为在实际的工业放大过程中提供了一种更为有效的方法。
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