公开(公告)号：CN102304516B

公开(公告)日：2013-11-13

申请号：CN201110250662.0

申请日：2011-08-29

Applicant: 厦门大学

Inventor： 王克坚 ,  彭会 ,  曲海东

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/435 ,  C12N15/81 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04 ,  A23K1/16 ,  C12R1/84

Abstract: 拟穴青蟹阴离子抗菌肽的毕赤酵母表达产物及其制备方法，涉及拟穴青蟹抗菌肽的基因工程表达。构建拟穴青蟹阴离子抗菌肽Scygonadin的重组表达载体；将所得重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；分离纯化所得的表达产物，获得重组蛋白，即拟穴青蟹阴离子抗菌肽Scygonadin。借助基因工程技术，利用pPIC9K毕赤酵母表达载体，表达出具有抗菌活性的拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin，该重组蛋白具有广谱的抗菌活性，抗菌活性与从雄性拟穴青蟹性腺中直接获得的Scygonadin纯品的抗菌结果相似。Scygonadin的基因工程表达产品将在抗病原微生物新药和动物饲料添加剂中应用。

公开(公告)号：CN102212124B

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201110127379.9

申请日：2011-05-17

Applicant: 厦门大学

Inventor： 刘海鹏 ,  陈荣元 ,  丁建 ,  王克坚

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/22 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04 ,  A23K1/17

CPC classification number: Y02A50/475

Abstract: 拟穴青蟹抗脂多糖因子及其制备方法与应用。涉及拟穴青蟹基因工程，提供拟穴青蟹抗脂多糖因子及其制备方法与应用。制备方法包括以下步骤：构建拟穴青蟹抗脂多糖因子重组表达载体；将所得重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；分离纯化步所得的表达产物，获得重组蛋白，即拟穴青蟹抗脂多糖因子。拟穴青蟹抗脂多糖因子对革兰氏阴性菌弗氏志贺氏菌、解藻朊酸弧菌、副溶血性弧菌、施氏假单胞菌和荧光假单胞菌，革兰氏阳性菌谷氨酸棒杆菌具有明显抑制生长作用和杀菌作用，在制备抑菌药和作为动物饲料抗菌添加剂中具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN102517293A

公开(公告)日：2012-06-27

申请号：CN201110386673.1

申请日：2011-11-28

Applicant: 厦门大学

Inventor： 王克坚 ,  陈贝 ,  曲海东

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/46 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 黑鲷抗菌肽表达载体与构建方法及表达产物与制备方法，涉及鱼类基因工程。根据获得的黑鲷抗菌肽AS-hepc2 cDNA序列，用pET28a+原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达AS-hepc2前体肽融合蛋白得可溶性表达产物，经亲和层析纯化后得目的蛋白，用以测定抗菌活性。构建的BL21(DE3)(pET28a/AS-hepc2)表达产物无需经过P3C蛋白酶切割标签，只需通过一次亲和纯化即可获蛋白纯品，简化操作步骤，降低操作成本，快速获得可溶性纯品蛋白。构建的BL21(DE3)(pET28a/AS-hepc2)表达体系再诱导表达5h，经镍亲和纯化后获得的蛋白纯品量可为二者的10～50倍，表达效率高。

公开(公告)号：CN102181535A

公开(公告)日：2011-09-14

申请号：CN201110068886.X

申请日：2011-03-21

Applicant: 厦门大学

Inventor： 王桂忠 ,  许晓军 ,  叶海辉 ,  李少菁 ,  王克坚

IPC: C12Q1/68

Abstract: 拟穴青蟹微卫星DNA标记及其筛选方法。涉及DNA分子标记技术，提供拟穴青蟹微卫星DNA标记及其筛选方法。所述拟穴青蟹微卫星DNA标记可编号为A508，筛选方法为：构建拟穴青蟹微卫星富集文库，挑选单克隆并进行测序；使用微卫星DNA位点查找软件获得含有拟穴青蟹微卫星序列的阳性克隆，确定拟穴青蟹微卫星DNA标记。A508微卫星标记可用于拟穴青蟹遗传结构分析、种质资源保护及分子标记辅助选育，其重复性良好，是一种可靠有效的分子标记。获得的拟穴青蟹微卫星DNA标记为拟穴青蟹的遗传结构分析、种质资源保护及分子标记辅助选育等奠定基础。

公开(公告)号：CN102167736A

公开(公告)日：2011-08-31

申请号：CN201110129015.4

申请日：2011-05-17

Applicant: 厦门大学

Inventor： 王克坚 ,  范丹青 ,  蔡灵

IPC: C07K14/435 ,  C12N15/12 ,  C07K1/04 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04 ,  A61P31/10 ,  A23K1/16

Abstract: 一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin及其应用。涉及甲壳类动物基因工程技术领域，提供一种拟穴青蟹抗菌肽Sphistin及其应用。所述拟穴青蟹抗菌肽Sphistin的分子式为C170H293N61O46S1，分子量为3959.61道尔顿。由38个氨基酸组成，来源于拟穴青蟹组蛋白Histone 2A蛋白的N端部分序列，是一种具有抗菌功能的多肽。采用现有的固相化学合成的方法即可获得纯度达95％以上拟穴青蟹抗菌肽Sphistin。所述拟穴青蟹抗菌肽Sphistin对多种革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌有显著的抗菌效果，抗菌谱宽、杀菌速率快，显示出极大的医用价值，在制备抗菌剂方面具有良好的应用。