一种分泌脂肪酶的毕赤酵母共表达伴侣蛋白基因工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN102911888B

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201210232950.8

    申请日:2012-07-06

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 沙冲

    Abstract: 本发明公开了一种分泌脂肪酶的毕赤酵母共表达伴侣蛋白基因工程菌及其应用,本发明运用了分子生物学技术在表达华根霉脂肪酶的毕赤酵母基因工程菌中插入两种伴侣蛋白ERO1和PDI基因。通过在两种伴侣蛋白的协同作用下,加速了外源蛋白的合成速度,从而增加了外源蛋白脂肪酶的分泌速率,其胞外酶活力达到32000U/mL;该酶在面包烘焙、造纸工业中树脂障碍控制、皮革脱脂中具有很好的应用前景。

    以含氢硅油疏水改性的二氧化硅为载体的固定化脂肪酶及其制备方法

    公开(公告)号:CN104087571A

    公开(公告)日:2014-10-08

    申请号:CN201410263491.9

    申请日:2014-06-14

    Abstract: 本发明公开了一种以含氢硅油疏水改性的二氧化硅为载体的固定化脂肪酶及其制备方法。所述固定化脂肪酶包括以含氢硅油改性的SiO2为载体,以及固定在所述SiO2上的脂肪酶。本发明所述的含氢硅油改性的SiO2载体制备的固定化脂肪酶,与其他方式改性的SiO2载体所制备的固定化脂肪酶相比,在具有较高催化活力及良好稳定性的条件下,其重复使用性得到有效提高,重复使用12次以后,酶活力仍能保持最初的80%以上,具有良好的重复使用性。同时本发明所述的制备方法具有工艺简单,操作成本低。

    高热稳定性华根霉脂肪酶
    104.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102653741B

    公开(公告)日:2013-09-18

    申请号:CN201210145501.X

    申请日:2010-08-13

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 高热稳定性华根霉脂肪酶,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶作为亲本,经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示,这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

    一种分泌脂肪酶的毕赤酵母共表达伴侣蛋白基因工程菌及其应用

    公开(公告)号:CN102911888A

    公开(公告)日:2013-02-06

    申请号:CN201210232950.8

    申请日:2012-07-06

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 沙冲

    Abstract: 本发明公开了一种分泌脂肪酶的毕赤酵母共表达伴侣蛋白基因工程菌及其应用,本发明运用了分子生物学技术在表达华根霉脂肪酶的毕赤酵母基因工程菌中插入两种伴侣蛋白ERO1和PDI基因。通过在两种伴侣蛋白的协同作用下,加速了外源蛋白的合成速度,从而增加了外源蛋白脂肪酶的分泌速率,其胞外酶活力达到32000U/mL;该酶在面包烘焙、造纸工业中树脂障碍控制、皮革脱脂中具有很好的应用前景。

    高热稳定性华根霉脂肪酶
    106.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102653741A

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN201210145501.X

    申请日:2010-08-13

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 高热稳定性华根霉脂肪酶,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶作为亲本,经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示,这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

    高活力华根霉脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN102604911A

    公开(公告)日:2012-07-25

    申请号:CN201210083913.5

    申请日:2009-11-11

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 高活力华根霉脂肪酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了一种由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶基因经定向进化而获得的一系列脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Ala129Ser、Lys161Arg、Thr195Tyr、Ala230Thr、Val261Gly、Lys322Arg、Ser373Asn以及上述氨基酸两个、三个或四个突变的组合。以转换数Kcat表示,这些突变体的酶活较出发菌株得到了提高。

    高催化活力脂肪酶突变体
    108.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102604910A

    公开(公告)日:2012-07-25

    申请号:CN201210083907.X

    申请日:2009-11-11

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 高催化活力脂肪酶突变体,是由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶基因,其Genbank登录号EF405962,运用易错PCR方法,通过多轮重组和定点突变,经定向进化而获得的脂肪酶突变体,在突变体的氨基酸序列中,包含氨基酸突变Lys322Arg;以转换数Kcat表示,脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。

    定向进化构建的催化活力提高的脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN102586203A

    公开(公告)日:2012-07-18

    申请号:CN201210083900.8

    申请日:2009-11-11

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 定向进化构建的催化活力提高的脂肪酶突变体,其由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCC M201021脂肪酶基因,其Genbank登录号EF405962,运用易错PCR方法,通过多轮重组和定点突变,经定向进化而获得的脂肪酶突变体,在突变体的氨基酸序列中,包含氨基酸突变Ala230Thr;以转换数Kcat表示,脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。

    热稳定性提高的脂肪酶突变体

    公开(公告)号:CN101974499B

    公开(公告)日:2012-07-11

    申请号:CN201010254620.X

    申请日:2010-08-13

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 喻晓蔚 徐岩 王睿

    Abstract: 热稳定性提高的脂肪酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶作为亲本,经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示,这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。

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