公开(公告)号：CN102174576A

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN201110027367.9

申请日：2011-01-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  王令 ,  张婷婷 ,  李亚明 ,  李战伟 ,  任刚 ,  杨涵江 ,  张存芳 ,  雷洁 ,  王瑞 ,  麻丽霞

IPC: C12N15/861 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体，属于基因工程技术领域。其中所述的方法包括：(1)内源基因靶位点的选择；(2)构建穿梭载体pAdTrack-CMV-T2A；(3)制备重组ZFN腺病毒载体pAd-T2A-ZFN；(4)腺病毒包装，得到ZFN腺病毒；(5)步骤(4)得到的ZFN腺病毒转染哺乳动物细胞。本发明利用ZFN技术，使动物哺乳细胞基因突变效率达到13％，大大提高了内源基因的定向敲除效率。

公开(公告)号：CN102206631A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110054992.2

申请日：2011-03-08

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李战伟 ,  杨涵江 ,  任刚 ,  王令 ,  张存芳 ,  张婷婷 ,  王瑞 ,  贾杰只 ,  雷洁 ,  李亚明 ,  支旭勃 ,  韩新艳 ,  辛颖

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C40B50/06 ,  C40B20/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：(1)3个锌指蛋白库的构建；(2)报告载体和报告菌株的构建；(3)有效锌指库的筛选；(4)有效锌指库的连接、组装；(5)利用细菌双杂交原理筛选出具有较高特异性和亲和力的三锌指蛋白。本发明所述的方法具有获得的锌指蛋白特异性和亲和性较高，组装的锌指核酸酶有更高的效率的优点。